Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest

• Autor(a) principal: Ramírez López, Camilo José
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: eng
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/30850; https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2023.184
• topic: Nelore (Bovino) - Reprodução; Sêmen; Antioxidantes; Proteínas; Lipídeos; Reprodução Animal

Este estudo foi realizado com o objetivo de determinar o efeito do repouso sexual sobre o estado oxidativo de espermatozóides de touros Nelore adultos e seu efeito sobre a composição de ácidos graxos e perfil protéico. Foram utilizados seis touros, os quais foram submetidos à avaliação andrológica e consecutivas coletas de sêmen pelo método de eletroejaculação. Para cada coleta de sêmen, as características físicas e morfológicas dos ejaculados foram avaliadas por meio de microscopia óptica convencional e microscopia de contraste de fase. Após análise dos parâmetros qualitativos do sêmen, o primeiro e o último ejaculado de cada um foram centrifugados para separar os espermatozóides do plasma seminal. A partir de alíquotas de esperma, a atividade enzimática de Super Oxido Dismutase, Catalase e Glutationa S- Transferase foi determinada por métodos colorimétricos. Os marcadores de peroxidação lipídica, malondialdeído e óxido nítrico também foram determinados. Usando cromatografia gasosa, foram identificados os ácidos graxos do esperma do primeiro e do último ejaculado. Para análise proteômica, as proteínas totais do esperma foram extraídas e precipitadas em solução CHAPS a 4%, quantificadas pelo método de Bradford e posteriormente analisadas por eletroforese monodimensional de curta duração e espectrometria de massas (LC-MS/MS). As proteínas foram identificadas usando o software PEAKS versão 7.0. As proteínas foram classificadas funcionalmente pela ferramenta RPSBLAST do BLAST versão 2.13.0 em categorias do banco de dados KOG. Para a análise proteômica quantitativa label-free, foram incluídas as proteínas identificadas em pelo menos três réplicas técnicas de cada grupo com um fold-change superior a 1,5 vezes. Os dados foram analisados usando o software GraphPad Prisma versão 9.1. Foram necessárias quatro coletas de sêmen para que os touros em repouso sexual apresentassem parâmetros espermáticos compatíveis com a aptidão reprodutiva. Diferenças (p<0,05) foram observadas entre todas as características físicas e morfológicas do primeiro e último ejaculado. Um total de 974 proteínas foram identificadas, das quais 735 eram comuns entre os dois grupos e 123 e 116 proteínas eram exclusivas dos espermatozóides do primeiro e do último ejaculado, respectivamente. A análise da classificação funcional revelou que as categorias KOG com maior número de proteínas classificadas foram Modificação pós-traducional, renovação de proteínas, chaperonas e Mecanismos de transdução de citoesqueleto e sinal. O perfil de abundância de proteínas mostrou que 6 proteínas foram diferencialmente abundantes nos espermatozóides do primeiro ejaculado e 30 proteínas foram diferencialmente abundantes nos espermatozóides do último ejaculado. Além disso, a análise por cromatografia gasosa permitiu a identificação de 19 ácidos graxos, sendo 47,3% do tipo saturado e 52,7% do tipo insaturado. Os ácidos graxos C12:0 e C18:0 apresentaram diferença entre os dois grupos, sendo mais abundantes nos espermatozoides do último ejaculado. Os resultados indicam que o estresse oxidativo pode estar relacionado às características espermáticas apresentadas pelos touros em repouso sexual, uma vez que o acúmulo de subprodutos da peroxidação lipídica pode causar alterações nas vias metabólicas utilizadas pelos espermatozóides para gerar energia utilizada para a motilidade e alterar a fluidez da membrana causando anormalidades espermáticas. Palavras-chave: Bovinos. Sêmen. Antioxidantes. Lipídios. Proteínas.