Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Souza, Ana Cláudia de
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/16859
Resumo: Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014.
id UNB_047d7167e713360b55943f2876e300b1
oai_identifier_str oai:repositorio2.unb.br:10482/16859
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Souza, Ana Cláudia deNagata, Tatsuya2014-11-13T13:01:56Z2014-11-13T13:01:56Z2014-11-132014-09-05SOUZA, Ana Cláudia de. Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta. 2014. xi, 151 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2014.http://repositorio.unb.br/handle/10482/16859Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014.A utilização de plantas como sistema de produção de proteínas é uma alternativa que está crescendo, e se tornando um importante recurso para a expressão de proteínas de uso terapêutico e de enzimas. Progressos significativos têm sido feitos no desenvolvimento de proteínas recombinantes produzidas em cultura celular e em tecidos de plantas, além de avanços no desenho e implementação de biorreatores. Portanto, o objetivo deste estudo é utilizar sistema de planta para expressão transiente de proteínas recombinantes. Um dos objetivos específicos é expressar a proteína docapsídeo de norovirus (NV CP) para montagem de virus like particles (VLP)utilizando vetor binário e os genes de supressor viral de silenciamento gênico(SG). Outro objetivo específico é produzir o antígeno multiepitopo do vírus dadengue utilizando vetor viral baseado no Cucumber mosaic virus (CMV). Comoobjetivo específico final o vetor baseado no CMV foi testado como vetor deindução de silenciamento gênico (VIGS). Para a expressão de NV CP, asproteínas VP1 e VP2 deste vírus foram clonadas em vetor binário ecoexpressas com a proteína viral supressora de SG, 126 K de Pepper mildmottle virus, em Nicotiana benthamiana. Para visualização, as VLPs forampurificadas de folhas agroinfiltradas e observadas no microscópio eletrônico de transmissão. O uso de vetor binário e gene de supressor viral de SG foi viável para expressão e montagem de NV VLP. Para a expressão da proteínamultiepitopo do vírus da dengue, foi realizada a modificação do vetor viralbaseado no CMV. O RNA 2 do vírus foi modificado para conter os sítios declonagem, e o genoma do vírus foi clonado em vetor binário para que o mesmo pudesse ser utilizado no sistema de agroinfiltração. Os resultados demonstraram que o vetor de expressão baseado no CMV produziu a proteína de interesse com baixo rendimento e que, portanto, deve ser aprimorado. Como objetivo de testar, portanto, a viabilidade deste vetor como VIGS, o mesmo foi modificado novamente para que pudesse realizar a clonagem utilizando sistema de recombinação. Para isso, o gene da fitoeno desaturase (PDS) foi clonado neste vetor, e os resultados demonstraram que o mesmo é infeccioso,porém novos testes serão realizados para aprimorar seu uso como VIGS. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACTThe use of plant system as protein expression is an alternative strategy for themass production of therapeutic proteins and enzymes. Significant progresshave been made in producing recombinant proteins in plant cell culture and inplant tissues for the implementation as bioreactors. Therefore, the aim of thisstudy is to use plant system for transient expression of human virus antigen.One of viral proteins expressed was the capsid protein of norovirus (NV-CP) forassembly of virus like particles (VLP) using binary vector and viral suppressorsilencing gene (SG). Another protein was the dengue multi-epitope antigenusing Cucumber mosaic virus (CMV)-based viral vector. CMV-based vector wastested also as the vector induced gene silencing (VIGS) vector. For expressionof NV-CP, the gene of VP1 and VP2 protein were cloned into binary vector andco-expressed with viral protein suppressor (SG), 126K protein of Pepper mildmottle virus in Nicotiana benthamiana. To confirm the VLPs assembly, thepurified VP1 fraction was observed by transmission electron microscopy. Theresults demonstrated that the system using binary vector and SG is viable forthe expression and assembly of NV VLPs. For dengue multiepitopo proteinexpression, the CMV-based vector was modified. CMV RNA 2 segment wasmodified to contain new cloning site and virus genome was cloned into thebinary vector to be used in agroinfiltration system. The results showed thatCMV-based protein expression vector produced the target protein with lowlevels and, therefore, should be improved the system. To evaluate the viabilityof the CMV as a VIGS vector, CMV vector was modified introducing Gatewayrecombination site (Invitrogen). The phytoene desaturase (PDS) gene wascloned into this vector and infiltrated expecting photo-breeching effect resultedas gene knock-down by VIGS. The results demonstrate that it was infectious,but clear knock-down phenotype as photo-breaching was not observed. Thefurther tests are needed to enhance the effect as VIGS.Faculdade de Medicina (FMD)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessExpressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de plantainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisExpressão transienteProteínas recombinantesporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2014_AnaClaudiadeSouza.pdf2014_AnaClaudiadeSouza.pdfapplication/pdf3213999http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/16859/1/2014_AnaClaudiadeSouza.pdfc330e78f60850f7c3b109e305fe3b27cMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain774http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/16859/2/license.txtb14e32eda7059b806df319ddf76e50d6MD52open access10482/168592024-02-29 10:33:54.837open accessoai:repositorio2.unb.br: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 Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2024-02-29T13:33:54Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.en.fl_str_mv Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
title Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
spellingShingle Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
Souza, Ana Cláudia de
Expressão transiente
Proteínas recombinantes
title_short Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
title_full Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
title_fullStr Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
title_full_unstemmed Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
title_sort Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta
author Souza, Ana Cláudia de
author_facet Souza, Ana Cláudia de
author_role author
dc.contributor.author.fl_str_mv Souza, Ana Cláudia de
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Nagata, Tatsuya
contributor_str_mv Nagata, Tatsuya
dc.subject.keyword.en.fl_str_mv Expressão transiente
Proteínas recombinantes
topic Expressão transiente
Proteínas recombinantes
description Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014.
publishDate 2014
dc.date.submitted.none.fl_str_mv 2014-09-05
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2014-11-13T13:01:56Z
dc.date.available.fl_str_mv 2014-11-13T13:01:56Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2014-11-13
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.citation.fl_str_mv SOUZA, Ana Cláudia de. Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta. 2014. xi, 151 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2014.
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://repositorio.unb.br/handle/10482/16859
identifier_str_mv SOUZA, Ana Cláudia de. Expressão transiente de proteínas recombinantes utilizando sistema de planta. 2014. xi, 151 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2014.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/16859
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
bitstream.url.fl_str_mv http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/16859/1/2014_AnaClaudiadeSouza.pdf
http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/16859/2/license.txt
bitstream.checksum.fl_str_mv c330e78f60850f7c3b109e305fe3b27c
b14e32eda7059b806df319ddf76e50d6
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1803573472507461632

Registros relacionados