Análise proteômica e funcional dos neutrófilos ativados por IL-8

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Phillippe Braga
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/50296
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2022.
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spelling Análise proteômica e funcional dos neutrófilos ativados por IL-8Proteomic and functional analysis of IL-8 activated neutrophilsNeutrófilosInterleucina 8PolimorfonuclearesDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2022.Os neutrófilos são células do sistema imune inato que apresentam grânulos citoplasmáticos e núcleo multilobulado, sendo classificadas como polimorfonucleares (PMN). Os PMNs podem ser ativados por bactérias, fungos ou por mediadores pró-inflamatórios como, por exemplo, espécies reativas de oxigênio (ERO), e interleucinas, dentre elas a interleucina-8 (IL-8). A IL-8 é uma quimiocina da família CXCL e apresenta grande afinidade por neutrófilos por meio dos receptores CXCR1 e CXCR2, desencadeando atividades como quimiotaxia, modulações do cálcio intracelular, desgranulação, dentre outras. Neutrófilos são os primeiros a chegar ao local da infecção, auxiliando no combate a patógenos e reparo dos tecidos lesionados. Como alguns estudos evidenciam falhas de regulação nessas células, a informação sobre os mecanismos de ativação, como a produção de espécies reativas de oxigênio, ganha relevância. Essas falhas estão associadas a patologias severas como, por exemplo, síndrome da angústia respiratória aguda, artrite reumatoide e síndrome da resposta inflamatória sistêmica. Ao analisar os mecanismos moleculares dos neutrófilos ativados pela IL-8 por meio de análise proteômica comparativa e associando tais dados às funções efetoras dos neutrófilos por meio de testes funcionais, observamos alterações relevantes com potenciais aplicações no futuro. Na análise proteômica do presente trabalho foram identificadas 653 proteínas, sendo 39 proteínas significativamente reguladas, das quais 16 apresentaram abundância diminuída e 23 com abundância aumentada. Tais proteínas evidenciaram diferentes processos biológicos enriquecidos, como desgranulação, estresse celular, exocitose e transporte mediado por vesículas. Além disso, foi abordada neste trabalho a controvérsia na literatura quanto à ativação das vias de NADPH oxidase dos neutrófilos por IL-8, pois alguns estudos defendem a ideia de que os neutrófilos expostos à IL-8 não ativam as vias de NADPH oxidase, enquanto outros afirmam que tal ativação ocorre. Para isso foram utilizadas duas concentrações de IL-8 (100 ng/mL e 50 ng/mL) e testes por microscopia, espectrofotometria (NBT) e ressonância eletrônica paramagnética (EPR). Os ensaios de EPR demonstraram diferença significativa na produção de EROs entre o controle e ambas concentrações de IL-8, bem como entre as duas concentrações de IL-8, já o teste de NBT evidenciou apenas diferença significativa entre controle e IL-8 (100 ng/ml). Dessa forma, além de esclarecer a controvérsia na literatura, o conjunto dos testes moleculares e funcionais permitiu propor hipóteses associando as proteínas ORM1, SERPINA1, HP e HRG aos processos de modulação de espécies reativas de oxigênio. Dessa forma, acreditamos que o presente trabalho foi capaz de criar novos insights mostrando diferentes aspectos na interação dos neutrófilos estimulados por IL-8.Neutrophils are cells of the innate immune system that have cytoplasmic granules and a multilobulated nucleus, being classified as polymorphonuclear (PMN). PMNs can be activated by bacteria, fungi or by inflammatory mediators such as reactive oxygen species (ROS) and interleukins, namely interleukin-8 (IL-8). IL-8 is a chemokine of the CXCL family and has great affinity for the CXCR1 and CXCR2 receptors, triggering activities as intracellular calcium modulation, degranulation, migration and others. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection, helping to fight pathogens and repair injured tissues. As some studies show failures in neutrophil regulation mechanisms, such as the production of reactive oxygen species in some diseases, information about such mechanisms gains relevance. These failures are associated with pathologies such as, the acute respiratory distress syndrome, rheumatoid arthritis and the systemic inflammatory response syndrome. By analyzing the IL-8 activated neutrophil molecular mechanisms by proteomics and associating such data to the results of functional tests, we observed relevant changes with potential applications in the future. In the proteomic analysis of the present work, 653 proteins were identified, 39 of which were significantly regulated proteins, being 23 with increased and 16 with decreased abundance. Such proteins revealed enriched biological processes such as degranulation, cellular stress, exocytosis and vesicle-mediated transport. Furthermore, the controversy in the literature regarding the activation of NADPH oxidase pathways in neutrophils by IL-8 was addressed in this work, as some studies support the idea that neutrophils exposed to IL-8 do not activate NADPH oxidase pathways, while others claim that such activation occurs. For this, two concentrations of IL-8 (100 ng/mL and 50 ng/mL) and tests by microscopy, spectrophotometry (NBT) and paramagnetic electron resonance (EPR) were used. The EPR assays showed a significant difference in the production of ROS between the control and both concentrations of IL-8, as well as between the two concentrations of IL-8, whereas the NBT test showed only a significant difference between control and IL-8 (100 ng/ml). Thus, in addition to clarifying the controversy in the literature, the set of molecular and functional tests allowed us to propose hypotheses associating the proteins ORM1, SERPINA1, HP and HRG to the processes of modulation of reactive oxygen species. Thus, we believe that the present work was able to create new insights showing different aspects of the interaction of neutrophils stimulated by IL-8.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularFontes, WagnerSantos, Phillippe Braga2024-09-03T19:50:13Z2024-09-03T19:50:13Z2024-09-032022-10-27info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSANTOS, Phillippe Braga. Análise proteômica e funcional dos neutrófilos ativados por IL-8. 2022. 79 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2022.http://repositorio.unb.br/handle/10482/50296porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-09-19T15:41:36Zoai:repositorio.unb.br:10482/50296Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-09-19T15:41:36Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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