Estudo do efeito adipogênico dos agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina em cultura de células

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vieira, Alessandra Guimarães
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49576
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2022.
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spelling Estudo do efeito adipogênico dos agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina em cultura de célulasAgrotóxicosProdutos químicos agrícolasObesidadeDesreguladores endócrinosAdipogêneseDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2022.O Brasil é um dos maiores consumidores mundiais de agrotóxicos. Muitos dos danos à saúde relacionados à exposição a essas substâncias ainda estão sob investigação. Trabalhos recentes evidenciam que alguns desses compostos podem atuar como obesogênicos ambientais, que são substâncias capazes de desregular o sistema endócrino, promover adipogênese e contribuir para o desenvolvimento da obesidade. Estudos preliminares e não publicados do grupo de pesquisa do qual faço parte, mostraram que os agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina promoveram acúmulo lipídico em pré-adipócitos 3T3-L1, sendo que o óxido de fembutatina ativou o PPAR. Considerando o uso intensivo de agrotóxicos no Brasil e os poucos estudos relacionados ao seu efeito desregulador endócrino, o presente estudo objetivou investigar outros mecanismos que podem estar relacionados ao efeito adipogênico promovido por essas substâncias, bem como avaliar seus possíveis efeitos sobre outros receptores nucleares. Para avaliar o efeito dos agrotóxicos sobre a atividade transcricional dos receptores nucleares GRα, PPARα, PPARβ/δ, TRα, TRβ e PXR, foi realizado o ensaio de transfecção e gene repórter da luciferase. Para tanto, células HeLa foram co-transfectadas com os plasmídeos contendo o DNA complementar do receptor nuclear e com os plasmídeos contendo seus respectivos elementos responsivos fusionados ao gene repórter da luciferase e tratadas por 24 horas com DMSO, com agonistas conhecidos dos receptores em estudo ou com concentrações crescentes dos agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina. Esse ensaio também foi realizado para avaliar se a cisteína 285, localizada no LBD do PPARγ, é importante para a ativação desse receptor pelo óxido de fembutatina. Considerando que tanto o bitertanol quanto o óxido de fembutatina induziram acúmulo lipídeo em células 3T3-L1, foi avaliado se esse efeito era dependente de PPARγ. Para tanto, células 3T3-L1 foram tratadas durante 15 dias, na presença ou ausência do antagonista de PPARγ T0070907, com veículo (DMSO), rosiglitazona ou concentrações dos agrotóxicos que promoveram acúmulo lipídico. No ensaio de transfecção e gene repórter, tanto o bitertanol quanto o óxido de fembutatina não apresentaram atividade agonista sobre os receptores avaliados. No ensaio utilizando o PPARγ com a mutação C285S, observou-se que a substituição da cisteína pela serina, aboliu a atividade transcricional, sugerindo que esse aminoácido é essencial para o efeito agonista do óxido de fembutatina sobre o PPARγ. No ensaio de diferenciação, a presença do antagonista T0070907, reduziu de forma significativa o acúmulo lipídico induzido por ambos os agrotóxicos, indicando que esse efeito ocorre via PPARγ. Os resultados desse trabalho podem contribuir para a melhor compreensão dos impactos que os agrotóxicos podem causar na saúde humana e de outros animais. Adicionalmente, podem fundamentar decisões governamentais relativas ao emprego desses compostos, bem como incentivar a busca por ativos eficientes, sem ou com menores impactos negativos. Entretanto, mais estudos são necessários para melhor elucidar seus mecanismos de ação.Brazil is one of the world’s largest consumers of pesticides. Many health hazards related to exposure to these substances are still under investigation. Recent studies show that some of these compounds can act as environmental obesogens, which are substances capable of disrupting the endocrine system, promoting adipogenesis, and contributing to the development of obesity. Preliminary and unpublished studies by the research group I belong to showed that pesticides bitertanol and fembutatin oxide promoted lipid accumulation in 3T3-L1 preadipocytes and that fembutatin oxide activated PPARγ. Considering the intensive use of pesticides in Brazil and the few studies related to their endocrine disrupting effects, the present study aimed to investigate other mechanisms associated with their adipogenic effects and evaluate their effects on other nuclear receptors. The evaluate the effect of pesticides on the transcriptional activity of the GRα, PPARα, PPARβ/δ, TRα, TRβ, and PXR nuclear receptors, was performed a transfection and luciferase reporter assay. HeLa cells were co-transfected with plasmids containing the complementary DNA of the nuclear receptor and the plasmids containing their respective responsive elements fused to the luciferase gene reporter and treated for 24 hours with DMSO, known agonists of the nuclear receptors in study or increasing concentrations of the pesticides bitertanol and fembutatin oxide. This assay was also performed to observe if cysteine 285, located in the LBD of PPARγ, is essential for activating this receptor by fembutatin oxide. Since both bitertanol and fembutatina oxide induced lipid accumulation in 3T3-L1 cells, it was evaluated whether this effect was PPARγ dependent. Therefore, 3T3- L1 cells were treated for 15 days, in the presence or absence of the antagonist the PPARγ T0070907, with vehicle (DMSO), rosiglitazone, or concentrations of the pesticides that promoted lipid accumulation. In the transfection and gene reporter assay, bitertanol and fembutatin oxide did not show agonist activity on the evaluated receptors. In the assay using PPARγ with the C285S mutation, it was observed that the substitution of cysteine for serine abolished transcriptional activity, suggesting that this amino acid is essential for the agonistic effect of fenbutatin oxide on PPARγ. In the differentiation assay, the presence of the antagonist, T0070907, significantly reduced the lipid accumulation induced by both pesticides indicating that this effect occurs via PPARγ. The results of this research contribute to a better understanding of pesticides' impacts on human and other animal health. Additionally, they can support government decisions regarding these compounds' use and encourage the search for efficient assets with less negative impacts. However, further studies are needed to elucidate their mechanisms of action better.Faculdade de Ciências da Saúde (FS)Departamento de Farmácia (FS FAR)Programa de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasNeves, Francisco de Assis RochaMilton, Flora AparecidaVieira, Alessandra Guimarães2024-08-06T17:20:25Z2024-08-06T17:20:25Z2024-08-062022-08-01info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfVIEIRA, Alessandra Guimarães. Estudo do efeito adipogênico dos agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina em cultura de células. 2022. 62 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49576porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-08-06T19:11:06Zoai:repositorio.unb.br:10482/49576Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-08-06T19:11:06Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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