Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Souza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/50271
Resumo: Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2024.
id UNB_3404a24db278b5cfb18c388866fc7603
oai_identifier_str oai:repositorio.unb.br:10482/50271
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKVArbovírusAedes aegyptiCélulas - cultura e meios de culturaEspectrometria de massaProteínasFosforilaçãoTese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2024.Mayaro virus (MAYV) e Chikungunya virus (CHIKV) são dois arbovírus pertencentes ao gênero Alphavirus e que são transmitidos pelo mosquito Aedes aegypti. Enquanto o MAYV é endêmico da América do Sul, o CHIKV já foi responsável por epidemias em todo o globo. Os elevados números de casos de arboviroses pelo mundo e o fato de muitas populações de mosquitos serem resistentes a inseticidas levaram à necessidade de desenvolvimento de estratégias alternativas de controle desses vírus. Houve um aumento expressivo na quantidade de estudos focados na interação vírus-vetor, muitos deles analisando aspectos moleculares, como as proteínas envolvidas nessa interação. Neste sentido, o presente estudo abordou a análise proteômica de células Aag-2 de Ae. aegypti infectadas com CHIKV em multiplicidade de infecção (MOI) 0,1 e tempos de coleta t = 0 h, 12 horas pós-infecção (h p.i.) e 48 h p.i. As amostras, em triplicatas biológicas, foram identificadas por espectrometria de massas após redução, alquilação e digestão. Entre outros resultados, foi observada uma maior abundância de proteínas relacionadas à tradução em 12 h p.i., enquanto proteínas relacionadas à produção de energia, em 48 h p.i. As imagens de microscopia eletrônica de transmissão revelaram, além de muitas partículas virais, mitocôndrias com formato alongado em 48 h p.i. Tal morfologia pode ser consequência de um provável desbalanço da rede mitocondrial decorrente da infecção viral, gerando uma maior demanda energética. Ademais, sabese que a fosforilação de proteínas está altamente relacionada à regulação espaçotemporal de diversos processos essenciais ao funcionamento dos organismos. Como os vírus sequestram a maquinaria celular do hospedeiro para sua própria replicação, espera-se encontrar uma modulação diferencial no padrão de fosforilação nas células infectadas. Assim, objetivou-se realizar uma análise fosfoproteômica de células Aag-2 infectadas com MAYV e CHIKV no presente trabalho. Foi realizada uma predição in silico de fosfoproteínas de Ae. aegypti e as 433 proteínas resultantes foram enriquecidas para processos como autofagia e via de sinalização MAPK. Para as análises experimentais, foram utilizados o MOI 1 e os tempos de coleta t = 0 h, 2 h p.i., 4 h p.i., 8 h p.i. e 12 h p.i., em quadruplicatas biológicas. As proteínas extraídas a partir das células Aag-2 foram utilizadas para Western Blot e espectrometria de massas. Os ensaios de Western Blot contra anticorpos anti-fosfoserina, fosfotirosina e fosfotreonina apresentaram diferentes padrões de marcação na comparação por anticorpo. A partir do processamento do extrato total de proteínas para a espectrometria de massas e dessalinização, foi realizado o enriquecimento de fosfopeptídeos por colunas de dióxido de titânio (TiO2). Após a obtenção dos dados da análise por espectrometria de massas, a análise de bioinformática nos permitirá verificar a influência da infecção por MAYV e CHIKV sobre a homeostase das células hospedeiras de Ae. aegypti nas vias metabólicas que são reguladas por eventos de fosforilação.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Mayaro virus (MAYV) and Chikungunya virus (CHIKV) are two arboviruses belonging to the genus Alphavirus and transmitted by the Aedes aegypti mosquito. While MAYV is endemic to South America, CHIKV has been responsible for epidemics across the globe. The high number of arbovirus cases around the world and the fact that many mosquito populations are resistant to insecticides have led to the need to develop alternative strategies to control these viruses. There has been a significant increase in the number of studies focused on the virus-vector interaction, many of them analyzing molecular aspects, such as the proteins involved in this interaction. In this sense, the present study addressed the proteomic analysis of Aag-2 cells from Ae. aegypti infected with CHIKV at multiplicity of infection (MOI) 0.1 and collection times t = 0 h, 12 hours post-infection (h p.i.) and 48 h p.i. The samples, in biological triplicates, were identified by mass spectrometry after reduction, alkylation, and digestion. Among other results, a greater abundance of proteins related to translation was observed at 12 h p.i., while proteins related to energy production were observed at 48 h p.i. Transmission electron microscopy images revealed, in addition to many viral particles, mitochondria with an elongated shape at 48 h p.i. This morphology may be a consequence of a probable imbalance in the mitochondrial network resulting from the viral infection, generating a greater energy demand. Furthermore, it is known that protein phosphorylation is highly related to the spatiotemporal regulation of several processes essential to the functioning of organisms. As viruses hijack the host's cellular machinery for their own replication, we expect to find a differential modulation in the phosphorylation pattern in infected cells. Thus, the aim was to perform a phosphoproteomic analysis of Aag-2 cells infected with MAYV and CHIKV in the present work. An in silico prediction of Ae. aegypti phosphoproteins was performed and the resulting 433 proteins were enriched for processes such as autophagy and the MAPK signaling pathway. For experimental analyses, MOI 1 and collection times t = 0 h, 2 h p.i., 4 h p.i., 8 h p.i. were used. and 12 h p.i., in biological quadruplicates. Proteins extracted from Aag-2 cells were used for Western blot and mass spectrometry. Western blot assays against anti-phosphoserine, phosphotyrosine, and phosphothreonine antibodies showed different staining patterns when compared by antibody. From the processing of the total protein extract for mass spectrometry and desalination, the enrichment of phosphopeptides was carried out using titanium dioxide (TiO2) columns. After obtaining data from mass spectrometry analysis, bioinformatics analysis will allow us to verify the influence of MAYV and CHIKV infection on the homeostasis of Ae. aegypti host cells in metabolic pathways that are regulated by phosphorylation events.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularCharneau, Sebastien OlivierSouza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de2024-09-02T21:18:05Z2024-09-02T21:18:05Z2024-09-022024-02-23info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfSOUZA, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de. Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV. 2024. 115 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2024.http://repositorio.unb.br/handle/10482/50271porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-09-19T15:42:21Zoai:repositorio.unb.br:10482/50271Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-09-19T15:42:21Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.none.fl_str_mv Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
title Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
spellingShingle Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
Souza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de
Arbovírus
Aedes aegypti
Células - cultura e meios de cultura
Espectrometria de massa
Proteínas
Fosforilação
title_short Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
title_full Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
title_fullStr Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
title_full_unstemmed Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
title_sort Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV
author Souza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de
author_facet Souza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Charneau, Sebastien Olivier
dc.contributor.author.fl_str_mv Souza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de
dc.subject.por.fl_str_mv Arbovírus
Aedes aegypti
Células - cultura e meios de cultura
Espectrometria de massa
Proteínas
Fosforilação
topic Arbovírus
Aedes aegypti
Células - cultura e meios de cultura
Espectrometria de massa
Proteínas
Fosforilação
description Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2024.
publishDate 2024
dc.date.none.fl_str_mv 2024-09-02T21:18:05Z
2024-09-02T21:18:05Z
2024-09-02
2024-02-23
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv SOUZA, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de. Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV. 2024. 115 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2024.
http://repositorio.unb.br/handle/10482/50271
identifier_str_mv SOUZA, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de. Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV. 2024. 115 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2024.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/50271
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv repositorio@unb.br
_version_ 1814508385750482944

Registros relacionados