Estrutura primária e atividade sobre canais KV e CaV do peptídeo TfTx, isolado da peçonha do escorpião Tityus fasciolatus

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Araújo, Israel Flor Silva de
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47461
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2023.
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spelling Araújo, Israel Flor Silva deFerroni, Elisabeth Nogueira2024-01-23T21:15:56Z2024-01-23T21:15:56Z2024-01-232023-07-06ARAÚJO, Israel Flor Silva de. Estrutura primária e atividade sobre canais KV e CaV do peptídeo TfTx, isolado da peçonha do escorpião Tityus fasciolatus. 2023. 77 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47461Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2023.Os escorpiões são aracnídeos bem adaptados e existem há cerca de 400 milhões de anos. A família Buthidae é notável pela importância clínica de suas espécies, que possuem peçonhas neurotóxicos. No Brasil, existem mais de 82 espécies, com destaque para o gênero Tityus. A peçonha desses escorpiões contém vários compostos, como peptídeos, enzimas e sais inorgânicos, com atividades diversas em estudo. Na região central de Brasília, próximo a universidade de Brasília, foram coletados aproximadamente 30 espécimes, entre machos e fêmeas de Tityus fasciolatus. Os animais foram acondicionados vivos no Biotério do Instituto de Biologia da Universidade de Brasília e através do processo de eletroestimulação foram extraídos 46 miligramas de peçonha bruta. O material foi submetido a purificação por HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) em duas etapas para a obtenção de 86,2 µg do peptídeo TfTx puro. A neurotoxina TfTx possui massa molecular de 3.584,64 Da [M+H]+ e sua sequência revelou 31 resíduos de aminoácidos estabilizados por quatro pontes dissulfeto. Nas comparações feitas em bancos de dados, observou-se que esse peptídeo possui alto grau de identidade com peptídeos atuantes em canais de potássio, Bmkk4 isolada da peçonha de Mesobuthus martensii e pMeKTx7 isolada da peçonha de Mesobuthus eupeus, além disso, foi observado um alto grau de identidade com dois outros peptídeos: CllNtx isolado da peçonha de Centruroides limpidus e ‘Peptídeo A’ isolado de Centruroides hirsutipalpus. Este segundo grupo de peptídeos não possui atividade fisiológica descrita e estudos realizados com essas moléculas sugerem que eles compõem uma família ainda não descrita de neurotoxinas com possível atividade em canais de potássio. Este trabalho teve como objetivo principal a elucidação da estrutura primária e a avaliação da atividade da toxina em canais iônicos seletivos para potássio (KV1.4, KV3.1 e hERG1) a concentrações de 500nM e 1µM, e em canais seletivos para cálcio (CaV1.2, CaV1.3, CaV2.1, CaV2.2 e CaV2.3) a uma concentração de 500nM. Porém, não foi observada modificação de corrente ou voltagem significativa para determinar a atividade do peptídeo nestes canais, permanece desconhecido o alvo molecular da toxina.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Scorpions are well-adapted arachnids and have been around for approximately 400 million years. The Buthidae family is notable for the clinical importance of its species, which possess neurotoxic venoms. In Brazil, there are over 82 species, with a focus on the genus Tityus. The venom of these scorpions contains various compounds, such as peptides, enzymes, and inorganic salts, with diverse activities under study. In the central region of Brasília, near the University of Brasília, approximately 30 specimens of both male and female Tityus fasciolatus were collected. The animals were kept alive in the Animal Facility of the Institute of Biology at the University of Brasília, and through the process of electrostimulation, 46 milligrams of crude venom were extracted. The material underwent purification through two stages of High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) to obtain 86.2 µg of pure TfTx peptide. The neurotoxin TfTx, a peptide isolated from the venom of Tityus fasciolatus, has a molecular mass of 3,583.64 Da [M+H]+ and its sequence revealed 31 amino acid residues stabilized by four disulfide bridges. In comparisons made in databases, it was observed that this peptide has a high degree of identity with peptides acting on potassium channels, Bmkk4 isolated from Mesobuthus martensii venom and pMeKTx7 isolated from Mesobuthus eupeus venom, in addition, a high degree of identity was also observed with two other peptides: CllNtx isolated from the venom of Centruroides limpidus and 'Peptide A' isolated from Centruroides hirsutipalpus. This second group of peptides has no regulated activity, and studies carried out with these recommendations show that they comprise a not yet described family of neurotoxins with possible activity on potassium channels. This work had as main objective the elucidation of the primary structure and the evaluation of the activity of the toxin in selective ion channels for potassium (KV1.4, KV3.1 and hERG1) at concentrations of 500nM and 1µM, and in selective channels for calcium (CaV1 2, CaV1.3, CaV2.1, CaV2.2 and CaV2.3) at a concentration of 500nM. However, no significant current or voltage change was observed to determine the peptide activity in these channels, the molecular target of the toxin remains unknown.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia MolecularA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessEstrutura primária e atividade sobre canais KV e CaV do peptídeo TfTx, isolado da peçonha do escorpião Tityus fasciolatusinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisEscorpião - toxinasNeurotoxinasPeptídeosCanais iônicosporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINALIsraelFlorSilvaDeAraujo_DISSERT.pdfapplication/pdf4501208http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/47461/1/IsraelFlorSilvaDeAraujo_DISSERT.pdff81a7a2d1426f1fadfa89d821fc790e6MD51open access10482/474612024-01-23 18:15:56.874open accessoai:repositorio2.unb.br:10482/47461Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2024-01-23T21:15:56Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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