Uso do FSH recombinante humano na produção in vitro de embriões bovinos
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| Data de Publicação: | 2022 |
| Tipo de documento: | Dissertação |
| Idioma: | por |
| Título da fonte: | Repositório Institucional da UnB |
| Texto Completo: | https://repositorio.unb.br/handle/10482/45368 |
Resumo: | Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2022. |
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Uso do FSH recombinante humano na produção in vitro de embriões bovinosOvócitoMaturação in vitroNelore (Zebu)GonadotrofinasBlastocistoDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2022.A produção in vitro de embriões (PIVE) de bovinos está em constante crescimento, e o desenvolvimento de novos protocolos é importante para a melhoria dos índices de produção, o que pode permitir o escalonamento da técnica. Dentre as etapas da PIVE, a maturação in vitro (MIV) é considerada essencial, pois ocorrem alterações no ovócito que permitem que a fecundação ocorra com sucesso e inicia-se o processo de desenvolvimento embrionário. In vitro, o FSH é necessário nas primeiras horas da MIV e, convencionalmente, os meios de maturação são suplementados com FSH de hipófise suína. Entretanto, esse extrato não possui uma padronização entre as partidas, possui contaminação de outros hormônios, como o LH, e encontra-se, atualmente, excasso no mercado. Em 1988 foi produzido o primeiro FSH recombinante humano. Através dessa tecnologia é possível produzir a molécula em grande escala, com alta pureza e sem variabilidade na composição. Existem algumas formulações de rhFSH disponíveis no mercado, como as folitropinas alfa, beta e delta. A folitropina alfa é utilizada na rotina clínica na reprodução humana desde 1995. Atualmente, essa molécula vem despertando interesse para uso na área animal, devido a sua padronização entre doses, pureza e meia vida mais prolongada. Nosso estudo avaliou o uso de FSH suíno (pFSH) ou folitropina-alfa (rhFSH), durante a maturação in vitro (MIV) de complexos cumulusoócitos (COC) recuperados de bovinos Nelore (Bos taurus indicus). Foram realizados quatro experimentos, todos usando CCO grau I (n = 11.245) submetidos a MIV em TCM199 sem FSH (-FSH) ou suplementados com 0,5 μg/mL de pFSH (Folltropin-V, Exp. 1 a 4) ou 0,1 UI rhFSH (Gonal-F, Exp. 2, 3 e 4). Foram feitas avaliações da expansão do cumulus, produção de blastocisto, criotolerância, contagem de células e taxa de prenhez. A expansão do cumulus foi maior (P<0,0001) na presença de pFSH, independentemente da concentração de SFB. FSH e o SFB aumentaram as taxas de clivagem e blastocisto (P<0,05), mas nenhuma interação entre eles foi observada (P>0,05). No Exp. 2, CCO (n=2.791) foram maturados na ausência de FSH (-FSH) ou com pFSH ou rhFSH, e foram submetidos à PIVE. Blastocistos foram avaliados para eclosão como frescos ou após vitrificação e desvitrificação (ou reaquecimento). A expansão do cumulus e as taxas de blastocisto foram maiores (P<0,05) nos grupos tratados com FSH (pFSH e rhFSH) do que sem FSH (-FSH). No entanto, não houve efeito do tratamento (P>0,05) nas taxas de eclosão de blastocistos frescos ou vitrificados. No Exp. 3, CCO (n=720) foram maturados nos grupos -FSH, pFSH ou rhFSH, e os blastocistos expandidos produzidos foram corados com Hoechst 33342 e iodeto de propídio. Blastocistos do grupo rhFSH apresentaram mais células no trofoblasto (P=0,0002), mas não no MCI (P=0,3231), quando comparados aos grupos pFSH e -FSH. No Exp. 4, usamos o mesmo desenho experimental do Exp. 2 mas em uma rotina comercial de PIVE, que incluiu o uso de CCO recuperado por OPU e sêmen sexado de macho, e a transferência de parte dos blastocistos produzidos. Tanto o pFSH quanto o rhFSH aumentaram as taxas de clivagem (P=0,0035) e de blastocistos (P=0,0102), mas não a taxa de prenhezez (P=0,1080), em comparação com -FSH. Em resumo, a folitropina-alfa é uma alternativa ao pFSH como suplemento para MIV de CCO bovino.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Bovine in vitro embryo production (IVEP) is constantly growing, and the development of new protocols is important for the scaling up of the technique. Among the steps of IVEP, in vitro maturation (IVM) is considered a key point, changes occur in the oocyte that allow successful fertilization. In vitro, FSH is required in the first hours of IVM and, conventionally, the maturation media are supplemented with FSH from swine pituitary, however this extract does not have a standardization between the batches, it has contamination of other hormones, such as LH, and is currently scarce on the market. In 1988 the first human recombinant FSH was produced. Through this technology it is possible to produce the molecule on a large scale, with high purity and without variability in composition. There are some rhFSH formulations available on the market, such as follitropins alpha, beta and delta. Follitropin alfa has been used in clinical routine in human reproduction since 1995. Currently, this molecule is attracting interest for use in the animal area, due to its standardization between doses, purity and longer half-life. Our study complexes evaluated the use of porcine FSH (pFSH) or follitropin-alpha (rhFSH) during in vitro maturation (IVM) of cumulusoocytes (COC) recovered from Nellore cattle (Bos taurus indicus). Four experiments were performed, all using grade I COC (n = 11,245) subjected to IVM in TCM199 without FSH (-FSH) or supplemented with 0.5 μg/mL pFSH (Folltropin-V, Exp. 1 to 4) or 0.1 IU rhFSH (Gonal-F, Exp. 2, 3 and 4). Cumulus expansion, blastocyst production, cryotolerance, cell count and pregnancy rate were evaluated. Cumulus expansion was greater (P<0.0001) in the presence of pFSH, regardless of FBS concentration. Both FSH and FBS increased cleavage and blastocyst rates (P<0.05), but no FSH x FBS interaction was observed (P>0.05). In Exp. 2, COC (n=2,791) were IVM in the absence of FSH (-FSH) or with pFSH or rhFSH, and underwent IVEP. Blastocysts were assessed for hatching as fresh or after vitrification and warming. Cumulus expansion and blastocyst rates were greater (P<0.05) in groups treated with (pFSH and rhFSH) than without FSH (-FSH). However, there was no effect of treatment (P>0.05) on hatching rates of fresh or vitrified blastocysts. In Exp. 3, COC (n=720) were IVM in groups -FSH, pFSH or rhFSH, and the expanded blastocysts produced were stained with Hoechst 33342 and propidium iodide. Blastocysts from the rhFSH group presented more cells in the trophoblast (P=0.0002), but not in the ICM (P=0.3231), when compared with pFSH and -FSH groups. In Exp. 4, we used the same experimental design as in Exp. 2 but in a commercial IVEP routine, which included the use of COC recovered by OPU and Ysorted semen, and the transfer of part of the blastocysts produced. Both pFSH and rhFSH increased cleavage (P=0.0035) and blastocyst rates (P=0.0102), but not pregnancy rate (P=0.1080), compared with -FSH. In summary, follitropin-alpha is an alternative to pFSH as a medium supplement for IVM of bovine COC.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biologia AnimalViana, João Henrique MoreiraMartins, Letícia Prates2022-12-22T22:04:05Z2022-12-22T22:04:05Z2022-12-222022-07-15info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfMARTINS, Letícia Prates. Uso do FSH recombinante humano na produção in vitro de embriões bovinos. 2022. 57 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.https://repositorio.unb.br/handle/10482/45368A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-01-31T17:16:11Zoai:repositorio.unb.br:10482/45368Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-01-31T17:16:11Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false |
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