Comparação de métodos de criopreservação em tecido ovariano de gatas domésticas : vitrificação versus congelamento lento

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ribeiro, Rayane Brandão
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49094
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2023.
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spelling Comparação de métodos de criopreservação em tecido ovariano de gatas domésticas : vitrificação versus congelamento lentoCriopreservação de órgãos, tecidos, etc.GatoBrasília (DF)Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2023.O presente estudo testou duas técnicas de criopreservação (vitrificação e congelamento lento) com combinações diferentes de crioprotetores. Para realizar o estudo, foram utilizados os ovários de 10 gatas submetidas a ovariohisterectomia eletiva na clínica veterinária Casa do Gato, localizada em Brasília, DF. No total, foram coletados 20 ovários, cada um dos quais foram divididos em oito fragmentos de 3mm³. Dois fragmentos de cada ovário foram imediatamente fixados para o controle fresco, enquanto os demais fragmentos (dois para cada grupo) foram aleatoriamente destinados aos tratamentos de congelamento lento ou vitrificação, em soluções que consistiam em: No grupo V1, a solução de equilíbrio (SE) continha 10% de DMSO, 10% de EG e trealose 0,1M, enquanto a solução de vitrificação (SV) tinha 20% de DMSO, 20% de EG e trealose 0,1M. Já no grupo V2, a solução de equilíbrio era composta por 10% de DMSO, 10% de EG e sacarose 0,1M, e a solução de vitrificação (SV) possuía 20% de DMSO, 20% de EG e sacarose 0,1M. No grupo V3, a solução de equilíbrio apresentava 20% de DMSO e trealose 0,1M, enquanto a solução de vitrificação (SV) continha 40% de DMSO e trealose 0,1M. Em contrapartida, nos grupos de congelamento lento, o CL1 tinha uma solução com 1M de DMSO, 1M de EG, 10% de SFB e 0,4% de trealose. O CL2 utilizou uma solução com 1,5M de DMSO, 10% de SFB e 0,4% de sacarose, enquanto o CL3 adotou uma solução com 1,5M de DMSO, 10% de SFB e 0,4% de trealose. Todas as amostras foram armazenadas em nitrogênio líquido durante pelo menos sete dias e os fragmentos foram descongelados/ desvitrificados e fixados após esse período. A análise histológica foi realizada para quantificar e classificar os folículos, os testes imuno-histoquímicos para avaliar a presença de folículos proliferativos. Além disso, foi realizada uma análise ultra-estrutural por meio de microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados indicaram que o grupo V1 apresentou os melhores resultados em relação à preservação da reserva folicular primordial e de folículos em crescimento, destacando-se como o mais eficaz na sobrevivência folicular. A análise de microscopia eletrônica dos folículos do grupo V1 mostrou aspectos positivos, como núcleos celulares normais, nucléolos bem estruturados e mitocôndrias com distribuição homogênea nas células da granulosa. No entanto, um achado indesejável foi observado, representado pelo descolamento do ovócito em relação às células da granulosa. Apesar dos resultados promissores, mas estudos futuros são necessários para maior comprovação da eficácia dos protocolos apresentados.The present study tested two cryopreservation techniques (vitrification and slow freezing) with different combinations of cryoprotectants. To conduct the study, ovaries from 10 female cats that underwent elective ovariohysterectomy at the veterinary clinic "Casa do Gato," located in Brasília, DF, were used. A total of 20 ovaries were collected, each of which was divided into eight 3mm³ fragments. Two fragments from each ovary were immediately fixed for the fresh control, while the remaining fragments (two for each group) were randomly assigned to slow freezing or vitrification treatments using solutions that consisted of the following: In group V1, the equilibrium solution (ES) contained 10% DMSO, 10% EG, and 0.1M trehalose, while the vitrification solution (VS) had 20% DMSO, 20% EG, and 0.1M trehalose. In group V2, the equilibrium solution consisted of 10% DMSO, 10% EG, and 0.1M sucrose, and the vitrification solution (VS) contained 20% DMSO, 20% EG, and 0.1M sucrose. In group V3, the equilibrium solution had 20% DMSO and 0.1M trehalose, while the vitrification solution (VS) contained 40% DMSO and 0.1M trehalose. In contrast, in the slow freezing groups, CL1 had a solution with 1M DMSO, 1M EG, 10% FBS, and 0.4% trehalose. CL2 used a solution with 1.5M DMSO, 10% FBS, and 0.4% sucrose, while CL3 adopted a solution with 1.5M DMSO, 10% FBS, and 0.4% trehalose. All samples were stored in liquid nitrogen for at least seven days, and the fragments were thawed/devitrified and fixed after this period. Histological analysis was performed to quantify and classify the follicles, immunohistochemical tests were used to evaluate the presence of proliferative follicles, and an ultrastructural analysis was carried out using transmission electron microscopy. The results indicated that group V1 showed the best results regarding the preservation of primordial follicle reserve and growing follicles, standing out as the most effective in follicular survival. The electron microscopy analysis of the follicles in this group showed positive aspects, such as normais cell nuclei, well-structured nucleoli, and mitochondria with homogeneous distribution in the granulosa cells. However, an undesirable finding was observed, represented by the detachment of the oocyte from the granulosa cells. Despite the promising results, further studies are needed to provide greater evidence for the effectiveness of the presented protocols.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biologia AnimalPaulini, FernandaRibeiro, Rayane Brandão2024-07-22T15:13:11Z2024-07-22T15:13:11Z2024-07-222023-07-24info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfRIBEIRO, Rayane Brandão. Comparação de métodos de criopreservação em tecido ovariano de gatas domésticas: vitrificação versus congelamento lento. 2023. 52 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49094porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-07-22T15:13:12Zoai:repositorio.unb.br:10482/49094Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-07-22T15:13:12Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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