Detecção e caracterização molecular de allexivirus e estudo de degenerescência em plantas de alho (allium sativum l.) provocada por vírus

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Melo Filho, Péricles de Albuquerque
Data de Publicação: 2003
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/45699
Resumo: Tese (doutorado)—Univesidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2003.
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spelling Detecção e caracterização molecular de allexivirus e estudo de degenerescência em plantas de alho (allium sativum l.) provocada por vírusAlho - doenças e pragasAlhoTese (doutorado)—Univesidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2003.Bulbos de alho das cultivares Amarante e Caçador foram coletados nos municípios de Água Fria (Goiás), Gama (Distrito Federal) e São Gonçalo (Minas Gerais) e analisados via Dot-Elisa com a finalidade de detectar a presença de espécies de Allexivirus. Os estudos foram desenvolvidos durante os anos de 1999 a 2003. Testes sorológicos foram realizados utilizando anticorpos monoclonais específicos para três espécies do gênero: Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B) e Garlic virus C (GarV-C) e um anti-soro polivalente capaz de detectar as três espécies citadas e mais Garlic virus D (GarV-D). Foram observadas reações positivas de algumas amostras para cada um dos anti-soros utilizados. A purificação biológica das espécies de Allexivirus foi efetuada após quatro inoculações mecânicas e sucessivas em Chenopodium quinoa. Oligonucletídeos específicos para amplificação da capa protéica de cada espécie foram sintetizados com base na seqüência de isolados japoneses obtidas do GenBank. Fragmentos amplificados por RT-PCR foram cio nados em pGEM-T e seqüenciados automaticamente. A comparação das seqüências do gene da capa protéica completa de cada isolado brasileiro com as seqüências dos isolados japoneses e um isolado argentino revelaram a presença de Garlic mite-bome füamentous virus (GarMbFV), GarV-C e GarV-D. Os resultados sorológicos indicaram também a possível presença de GarV-B, entretanto, essa espécie não foi amplificada por RT-PCR Foram produzidas sondas não-radioativas para detecção dos Allexivirus encontrados no BrasiL Este trabalho contribuiu para o primeiro relato da ocorrência de espécies de Allexivirus no Brasil e o estabelecimento de metodologia de detecção por RT-PCR no país. Foram também desenvolvidos estudos de degenerescência de plantas de alho provocada por infecção por vírus. Os estudos foram conduzidos em seis experimentos sob condições de campo nos municípios de Água Fria/GO e Gama/DF. O delineamento experimental adotado foi de blocos ao acaso com n + 2 tratamentos e seis repetições, onde n foi o número de gerações em que o alho foi exposto ao complexo viral no ano anterior e os outros dois tratamentos foram o alho livre de vírus e o material utilizado pelos agricultores. O alho livre de vírus foi obtido por cultura de ápices caulinares e termoterapia e indexado por Isem na Embrapa Hortaliças. As plantas livres de vírus produziram, em média, 100 % mais que a testemunha. Até a quarta exposição a produtividade foi superior em pelo menos 50 % em relação ao controle. A qualidade dos bulbos também foi superior à testemunha em todos os tratamentos. Da primeira à quarta exposição, foram produzidos aproximadamente 72 %, 60 %, 59 % e 53 % dos bulbos nas classes de 4 a 7 (as mais valorizadas no mercado), respectivamente,. Já o controle produziu aproximadamente 35 % dos bulbos nestas mesmas classes. O trabalho mostrou que é viável a produção de alho utilizando-se semente produzida a partir de bulbilhos livre de vírus com excelente rendimento, no mínimo, até a sétima exposição consecutiva ao complexo viral encontrado sob condições de campo. Em ambientes com menor pressão de inóculo, é possível que o processo possa se estender por mais gerações. Em todos os anos foi crescente a infecção por vírus da primeira para a última exposição. Com base nos dados obtidos, propõe-se um sistema de multiplicação de bulbilhos-semente de alho livres de vírus para utilização por parte dos agricultores.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).In order to detect the presence of Allexviruses naturally infecting garlic plants under field conditions, bulbs of cultivars Amarante and Caçador were collected in crops located at the counties of Água Fria (Goiás State), Gama (Federal District) and São Gonçalo (Minas Gerais State) during the growing seasons of 1999 to 2003. The bulbs were tested using monoclonal antibodies specific to three species of Allexvirus genus: Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B) and Garlic virus C (GarV-C) and with a polyclonal antiserum able to detect ali the three species mentioned before and also Garlic virus D (GarV-D). Positive reactions were observed for ali antisera used. The detected viruses species were biologically isolated after four sequential mechanical passages onto Chenopodium quinoa. Specific primers based in the coat proteins sequences of japonese isolates (obtained from the GeneBank) were designed for amplification by RT-PCR of isolated Allexiruses. The amplified fragments were cloned in pGEM-T vectors and sequenced. Sequence comparisons of the coat protein genes revealed the presence of Garlic mite-bome filamentous virus (GarMbFV), GarV-C and GarV-D. Serological results also indicated the possible presence of GarV-B, however, this virus species were not amplified by RT-PCR. Cloning of the coat protein genes allowed the production of non radioactive probes specific to the isolated Allexviruses to be used as detection method. Studies of degeneration of garlic plants caused by garlic viral diseases, were also carried out in this work under field conditions at the counties of Água Fria (Goiás State) and Gama (Federal District). Six field trials were conducted with six replicates and n+2 treatments in 1999 to 2002, where “n” represented the number of generations/year which the garlic plants were exposed to the viral complex and the other two were a virus-free cloves and a control (cultivar adopted by growers). Virus-free garlic was obtained by tip culture and thermoterapy and after, indexed by xvn Isem at Embrapa Vegetables. The results showed that, in average, virus-free plants had a production 100 % higher than the control. After four sequential field generations, garlic plants still produced 50 % more than the control plants. Also, the quality of bulbs produced were higher in ali treatments compared to control. From the first until fourth field generation, bulbs classified in classes 4 to 7 corresponded to 72 %, 60 %, 59 % and 53 %, respectively, of the total production. Control plants produce 35 % in these classes. These results showed that the production of garlic is viable using virus-free cloves at least up to the exposition to virus complex under field conditions. Generations forward could be extended in environment with a lower inoculun pressure of virus. It is worthy to mention that, in ali years studied infection by viruses has increased after successive field cultivation. Based on our results a system of seed production was proposed considering the increasing yield rates obtained in this work.Resende, Renato de OliveiraMelo Filho, Péricles de Albuquerque2023-01-24T22:01:43Z2023-01-24T22:01:43Z2023-01-242003info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfMELO FILHO, Péricles De Albuquerque. Detecção e caracterização molecular de allexivirus e estudo de degenerescência em plantas de alho (allium sativum l.) provocada por vírus. 2003. xviii, 116 f., il. Tese (Doutorado em Fitopatologia) — Universidade de Brasília, Brasília, 2003.https://repositorio.unb.br/handle/10482/45699info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-08T00:16:19Zoai:repositorio.unb.br:10482/45699Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-08T00:16:19Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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