Avaliação da acurácia da reação em cadeia de polimerase em tempo real (QPCR) para o diagnóstico da hanseníase no soro de sangue periférico

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Monteiro, Cynthia Bettini Lins de Castro
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/46080
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2022.
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spelling Avaliação da acurácia da reação em cadeia de polimerase em tempo real (QPCR) para o diagnóstico da hanseníase no soro de sangue periféricoAssessment of the accuracy of the real-time polymerase chain reaction (QPCR) for the diagnosis of leprosy in peripheral blood serumHanseníaseMycobacterium lepraeReação em cadeia de polimeraseDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2022.Introdução: A hanseníase é uma doença infecto contagiosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae e pelo Mycobacterium lepromatosis, que atinge principalmente a pele e o sistema nervoso periférico. Configura um problema de saúde pública, com suas manifestações, resultando da interação entre patógeno-hospedeiro. Seu diagnóstico é basicamente clínico, porém exames complementares podem aumentar a acurácia do diagnóstico e resultar em início mais precoce do tratamento e na interrupção da cadeia de transmissão. Metodologia: Trata-se de estudo transversal analítico com objetivo de avaliar a acurácia diagnóstica da reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) para o diagnóstico de hanseníase no soro de sangue periférico. Consiste na identificação da presença de fragmento genético do M. leprae no soro periférico de pacientes imunocompetentes atendidos no ambulatório de hansenologia do HUB de 01/06/2020 a 01/06/2021. Uma quantidade de 1,5ml do soro periférico foi desidratada/concentrada em incubadora e utilizada para análise molecular. Seu resultado foi comparado com o soro não concentrado, chamado de soro normal e esses dados comparados. O alvo escolhido no estudo foi o de sequências repetitivas RLEP. Resultados: Foram incluídos 56 pacientes no estudo, sendo 20 casos e 36 controles. As idades tiveram média de 39,9 anos (DP 17,3) no grupo dos casos e 45,19 anos no dos controles (DP 14,75). A maioria dos pacientes foi diagnosticada com a forma Virchowiana (multibacilar – 50%), seguido das formas dimorfa (30%), tuberculóide (15%) e neural pura (5%). Trabalho anterior utilizou 200µl de soro, enquanto a análise do presente estudo utilizou o conteúdo de até 1500µl, o chamado soro concentrado. Apenas dois pacientes tiveram a positividade do gene RLEP na análise de soro concentrado, gerando sensibilidade de 10% (IC 95% - 2,79-30,10%). A avaliação do soro concentrado demonstrou melhor acurácia, pois a especificidade foi de 100% (IC 95% - 2,79-30,10%), enquanto no soro normal a especificidade ficou em 94,44% (IC 95% - 81,86-98,46%). Na comparação das duas técnicas de análise no soro, o teste de Mcnemar demonstrou que as técnicas não apresentaram diferença estatística (p = 0.633), apesar da melhor especificidade no soro concentrado. Entretanto, a avaliação de concordância pelo método Kappa resultou em 0.3 (IC 95% - 0.05 - 0.55), mostrando que os testes não têm boa concordância. Conclusão: Mesmo com o aprimoramento de técnicas, incluindo a concentração da amostra, o qPCR do RLEP no soro de sangue periférico dos pacientes acometidos mantém baixa sensibilidade, apesar da especificidade elevada. Estes achados sugerem que o qPCR do sangue tem utilidade limitada no diagnóstico laboratorial da hanseníase.Introduction: Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis that mainly affects the skin and peripheral nervous system. It constitutes a public health problem, and its manifestations are a result of pathogen-host interactions. Its diagnosis is basically clinical, but complementary tests can increase the accuracy of the diagnosis and result in earlier initiation of treatment and interruption of the transmission chain. Methodology: This is an analytical cross-sectional study with the objective of evaluating the diagnostic accuracy of the real-time polymerase chain reaction (qPCR) for the diagnosis of leprosy in peripheral blood serum. It consists of identifying the presence of a genetic fragment of M. leprae in the peripheral serum of immunocompetent patients treated at the HUB leprosy clinic from 06/01/2020 to 06/01/2021. An amount of 1,5 ml of peripheral serum was dehydrated/concentrated in an incubator and used for molecular analysis. Their result was compared with the unconcentrated serum, called normal serum, and these data compared. The target chosen in the study was the repetitive sequences RLEP. Results: A total of 56 patients were included in the study, being 20 cases and 36 controls. Ages averaged 39.9 years (SD 17.3) in the case group and 45.19 years in the controls (SD 14.75). Most patients were diagnosed with the Virchowian form (multibacillary - 50%), followed by borderline (30%), tuberculoid (15%) and pure neural (5%) forms. Previous work used 200µl of serum, while the analysis of the present study used the content of up to 1500µl, the so-called concentrated serum. Only 2 patients had positive expression of the RLEP gene in the concentrated serum analysis, with a sensitivity of 10% (95% CI - 2.79-30.10). The evaluation of concentrated serum showed better accuracy, as the specificity was 100% (95% CI - 2.79-30.10), while in normal serum the specificity was 94.44% (95% CI - 81.86 -98.46). Comparing these two techniques with the Mcnemar test, no significantly statistical difference was observed (p = 0.633), despite the better specificity in concentrated serum. However, the agreement evaluation by the Kappa method resulted in 0.3 (95% CI - 0.05 - 0.55), showing that these tests had limited agreement. Conclusion: Despite improvements of techniques and sample concentration, the qPCR of RLPE in the serum of affected patients showed low sensitivity, even with its high specificity and can contribute to the evaluation of difficult-to-manage cases. These findings suggest that qPCR of RLPE in the serum has limited utility in the diagnosis of leprosy.Faculdade de Medicina (FMD)Programa de Pós-Graduação em Ciências MédicasGomes, Ciro Martinscynbettini@gmail.comMonteiro, Cynthia Bettini Lins de Castro2023-07-12T22:22:04Z2023-07-12T22:22:04Z2023-07-122022-09-30info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfMONTEIRO, Cynthia Bettini Lins de Castro. Avaliação da acurácia da reação em cadeia de polimerase em tempo real (QPCR) para o diagnóstico da hanseníase no soro de sangue periférico. 2022. 57 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/46080porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-03-20T16:31:51Zoai:repositorio.unb.br:10482/46080Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-03-20T16:31:51Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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