Expandindo o estudo genético de Fonsecaea pedrosoi : o uso de marcadores e transformação biobalística para inativação do gene de triptofano sintase (trpB)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Favilla, Luisa Dan
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47462
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2023.
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Neste trabalho, foi demonstrado que a deleção de genes e a geração do mutante por recombinação homóloga são possíveis para Fonsecaea pedrosoi pelo uso de duas abordagens: uso de PCR de dupla junta para construção de cassete, seguido pela entrega do marcador dividido por transformação biobalística . Por meio de análises in silico, identificamos que F. pedrosoi apresenta o aparato enzimático completo necessário para a biossíntese do triptofano (trp). O gene que codifica uma triptofano sintase trpB – que converte o indole 3 glicerol fosfato e a serina em triptofano – foi interrompido. O mutante auxotrófico ∆trpB pode crescer com suprimento externo de Ltriptofano, mas a germinação, a viabilidade dos conídios e o crescimento radial são defeituosos em comparação com as cepas selvagens e reconstituídas. O uso de 5-FAA para seleção de fenótipos trp- e para contra-seleção de cepas portadoras do gene trp também foi demonstrado. As ferramentas moleculares para o estudo funcional dos genes, aliadas às informações genéticas dos bancos de dados genômicos, aumentam significativamente nosso entendimento da biologia e da patogenicidade dos agentes causadores da CBM.Chromoblastomycosis (CBM) is a disease caused by several dematiaceous fungi from different genera, and Fonsecaea is the most common which has been clinically isolated. Genetic transformation methods have recently been described; however, molecular tools for the functional study of genes have been scarcely reported for those fungi. In this work, we demonstrated that gene deletion and generation of the null mutant by homologous recombination are achievable for Fonsecaea pedrosoi by the use of two approaches: use of double-joint PCR for cassette construction, followed by delivery of the splitmarker by biolistic transformation. Through in silico analyses, we identified that F. pedrosoi presents the complete enzymatic apparatus required for tryptophan (trp) biosynthesis. The gene encoding a tryptophan synthase trpB — which converts indole 3 glicerol fosfate and serine in triptophan — was disrupted. The ∆trpB auxotrophic mutant can grow with external trp supply, but germination, viability of conidia, and radial growth are defective compared to the wild-type and reconstituted strains. The use of 5-FAA for selection of trp- phenotypes and for counter-selection of strains carrying the trp gene was also demonstrated. The molecular tools for the functional study of genes, allied to the genetic information from genomic databases, significantly boost our understanding of the biology and pathogenicity of CBM causative agents.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia MolecularBocca, Anamélia LorenzettiFavilla, Luisa Dan2024-01-23T21:15:57Z2024-01-23T21:15:57Z2024-01-232023-07-14info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFAVILLA, Luisa Dan. Expandindo o estudo genético de Fonsecaea pedrosoi: o uso de marcadores e transformação biobalística para inativação do gene de triptofano sintase (trpB). 2023. 50 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47462A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-01-23T21:15:57Zoai:repositorio.unb.br:10482/47462Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-01-23T21:15:57Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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