Análise funcional de promotores para expressão heteróloga e biofortificação para aumento de folatos em alface (Lactuca sativa L.)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Monteiro, Tatiane Rosa
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47735
Resumo: Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Programa em Rede Multi-Institucional do Pró-Centro-Oeste de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biodiversidade, 2019.
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spelling Monteiro, Tatiane RosaAragão, Francisco José Lima2024-02-14T19:38:50Z2024-02-14T19:38:50Z2024-02-142019-07-29MONTEIRO, Tatiane Rosa. Análise funcional de promotores para expressão heteróloga e biofortificação para aumento de folatos em alface (Lactuca sativa L.). 2019. 105 f., il. Tese (Doutorado em Biotecnologia e Biodiversidade) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2019.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47735Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Programa em Rede Multi-Institucional do Pró-Centro-Oeste de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biodiversidade, 2019.A alface é uma hortaliça com ampla distribuição por todo o país, representando uma das plantas mais cultivadas e a folha mais consumida no Brasil e no mundo. No entanto, o sistema de produção da alface no Brasil é afetado por vários fatores ambientais, doenças e pragas que causam grandes prejuízos aos produtores. Neste contexto, a transformação genética de plantas se destaca como uma importante ferramenta biotecnológica e tem sido empregada com os mais diversos objetivos. Contudo, o sucesso no processo de transformação de plantas está associado à utilização de promotores estáveis. Sendo relatado em alface uma dificuldade na manutenção da estabilidade da expressão de transgenes, possivelmente pela utilização do promotor 35SCaMV. No primeiro capítulo o objetivo do trabalho foi testar dois novos promotores, visando alternativas para trabalhos de transformação genética de alface. Foram obtidas 12, 8 e 5 linhagens geneticamente modificadas expressando o gene gus sob o controle dos promotores pACT2, pAVP1 e p35SCaMV, respectivamente. Cada planta foi analisada por PCR e ensaio histoquímico em cada geração (T0, T1 e T2). A atividade de GUS foi detectada no tecido foliar de todas as plantas transgênicas (T0) obtidas com o pACT2, em 3 das 8 plantas de pAVP1, e 2 das 5 plantas de p35SCaMV. As plantas transgênicas também foram submetidas ao ensaio fluorimétrico para a quantificação da atividade de GUS. No segundo capítulo o objetivo foi a biofortificação para aumento de folatos em plantas geneticamente modificadas de alface. Experimentos de transformação genética de alface mediada por Agrobacterium tumefaciens foram realizados para obtenção das linhagens geneticamente modificadas expressando os genes gchI e adcs, sob o controle dos promotores ACT2 e AVP1, respectivamente. Foram confirmadas 3 linhagens transgênicas após análise por PCR. As linhagens transgênicas obtidas apresentam um aumento de até 6,3 vezes mais folatos totais quando comparadas a alface não transgênica (controle). E até 2,5 vezes mais folatos quando comparadas ao espinafre (Spinacea oleracea), que é uma planta rica em folatos.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Lettuce is a vegetable widely distributed throughout the country, representing one of the most cultivated plants and the most consumed leaf in Brazil and in the world. However, the lettuce production system in Brazil is affected by several environmental factors, diseases and pests that cause great damage to producers. In this context, the genetic transformation of plants stands out as an important biotechnological tool and has been employed for the most diverse purposes. However, success in the plant transformation process is associated with the use of stable promoters. Being reported in lettuce a difficulty in maintaining the stability of transgene expression, possibly due to the use of the 35SCaMV promoter. In the first chapter the objective of this work was to test two new promoters, aiming at alternatives for lettuce genetic transformation works. Twelve, 8 and 5 genetically modified strains expressing the gus gene were obtained under the control of the pACT2, pAVP1 and p35SCaMV promoters, respectively. Each plant was analyzed by PCR and histochemical assay in each generation (T0, T1 and T2). GUS activity was detected in the leaf tissue of all transgenic (T0) plants obtained with pACT2 in 3 of 8 pAVP1 plants and 2 of 5 p35SCaMV plants. The transgenic plants were also submitted to fluorimetric assay to quantify GUS activity. In the second chapter the objective was biofortification for folate increase in genetically modified lettuce plants. Agrobacterium tumefaciens mediated lettuce genetic transformation experiments were carried out to obtain genetically modified strains expressing the gchI and adcs genes, under the control of the ACT2 and AVP1 promoters, respectively. Three transgenic strains were confirmed after PCR analysis. The transgenic strains obtained showed an increase of up to 6.3 times more total folates when compared to non transgenic lettuce (control). And up to 2.5 times more folate compared to spinach (Spinacea oleracea), which is a folate-rich plant.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biodiversidade (Rede PRÓ-CENTRO-OESTE)porAnálise funcional de promotores para expressão heteróloga e biofortificação para aumento de folatos em alface (Lactuca sativa L.)Functional analysis of promoters for heterologous expression and biofortification for folate increase in lettuce (Lactuca sativa L.)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisTransformação genéticaFolatosAlface - genéticaPlantas - melhoramento genéticoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2019_TatianeRosaMonteiro.pdf2019_TatianeRosaMonteiro.pdfapplication/pdf2166107http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/47735/1/2019_TatianeRosaMonteiro.pdf3af624ee4657131265907145904728cbMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain102http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/47735/2/license.txtaed4704d04bb260d4decd80db311aaa5MD52open access10482/477352024-02-16 12:35:08.167open accessoai:repositorio2.unb.br:10482/47735U3VibWlzc8OjbyBlZmV0aXZhZGEgZGUgYWNvcmRvIGNvbSBsaWNlbsOnYSBjb25jZWRpZGEgcGVsbyBhdXRvciBlL291IGRldGVudG9yIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcy4KBiblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2024-02-16T15:35:08Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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