Avaliação do potencial da terapia fotodinâmica associada ao nanocarreador AlPcNLS na modulação de morte celular imunogênica em melanoma murino in vitro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Simoes, Marina Mesquita
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/50291
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2024.
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spelling Avaliação do potencial da terapia fotodinâmica associada ao nanocarreador AlPcNLS na modulação de morte celular imunogênica em melanoma murino in vitroMelanomaTerapia fotodinâmicaNanocarreadoresMorte celular imunogênicaCélulas dendríticasDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2024.A terapia fotodinâmica (TFD) é baseada na produção de espécies oxidativas por um fotossensibilizador, que é uma molécula capaz de converter energia luminosa específica em potencial químico. O estresse oxidativo gerado por esta terapia pode induzir a morte celular imunogênica (MCI) e desencadear uma resposta imunológica. Esse tipo de morte gera diferentes padrões moleculares associados a danos (DAMPs) para o sistema imunológico, que podem resultar na ativação das células dendríticas, especializadas na apresentação de antígenos. Portanto, a TFD surge como uma alternativa para o tratamento do câncer, uma vez que desempenha um papel importante na ativação do sistema imunológico e consiste em um tratamento local não invasivo. No entanto, o uso dessa terapia ainda enfrenta algumas limitações, como baixa fotossensibilidade de longo prazo e baixa biodisponibilidade dos fotossensibilizadores. Para promover maior eficácia terapêutica e ativação do sistema imunológico, o grupo de trabalho atual desenvolveu um novo sistema de fotossensibilizador de terceira geração composto por alumínio cloro ftalocianina associada a nanopartículas lipídicas sólidas baseadas em manteiga amazônica (AlPcNLS). Foram realizados experimentos para avaliar seu potencial terapêutico, com o objetivo de verificar se o protocolo estabelecido pode induzir a morte celular imunogênica e a ativação das células dendríticas (CDs). Nos ensaios in vitro, foi utilizado a linhagem celular de melanoma B16-F10 e células dendríticas precursoras da medula óssea de camundongos C57BL/6. Para o tratamento, as células de melanoma foram expostas ao nanocarregador por 15 minutos, mantidas no escuro ou irradiadas por 10 minutos com luz LED (660 nm a uma densidade de energia de 25,88 J/cm2 ). Mitoxantrona foi utilizado como controle positivo para a morte celular imunogênica. Os ensaios de viabilidade celular mostraram que o nanocarreador desempenhou bem sua função citotóxica quando foi excitado pela luz, o que desencadeou na produção de espécies reativas de oxigênio. A imunomarcação para microscopia confocal e para microscopia eletrônica de transmissão mostraram que o tratamento induziu a produção de DAMPs. Após tratamento das células B16-F10, foi possível observar a produção de autofagossomos e de citocinas como IL-12, que desempenham um papel importante no processo de resposta imunológica. A avaliação de células dendríticas por microscopia mostraram alterações morfológicas, após o cocultivo com células tumorais tratadas. Além disso as CDs, apresentaram uma maior expressão de componentes de membrana como MHCII e CD86, bem como produção de citocinas como IL-12 e IFN- γ, que são fatores importante para a ativação do sistema imunitário. Desta forma, os resultados indicam que o protocolo estabelecido com a nanoestrutura desenvolvida tem o potencial de melhorar a eficácia da TFD, promovendo a morte celular imunogênica e induzindo alterações fenotípicas nas células dendríticas, indicativas de sua ativação.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Photodynamic therapy (PDT) is based on the production of oxidative species by a photosensitizer, which is a molecule capable of converting specific light energy into chemical potential. The oxidative stress generated by this therapy can induce immunogenic cell death (ICD) and trigger an immune response. This type of death generates different molecular patterns associated with damage (DAMPs) for the immune system, which can result in the activation of dendritic cells, specialized in antigen presentation. Therefore, PDT emerges as an alternative for cancer treatment, as it plays an important role in activating the immune system and consists of a noninvasive local treatment. However, the use of this therapy still faces some limitations, such as low long-term photosensitivity and low bioavailability of photosensitizers. To promote greater therapeutic efficacy and immune system activation, the current working group has developed a new third-generation photosensitizer system composed of aluminum chloro phthalocyanine associated with solid lipid nanoparticles based on Amazonian butter (AlPcSLN). Experiments were conducted to evaluate its therapeutic potential, aiming to verify if the established protocol can induce immunogenic cell death and dendritic cell activation. For in vitro assays, the B16-F10 melanoma cell line and precursor bone marrow dendritic cells from C57BL/6 mice were used. For treatment, melanoma cells were exposed to the nanocarrier for 15 minutes, then kept in the dark or irradiated for 10 minutes with LED light (660 nm at 25.88 J/cm2 energy density). Mitoxantrone was used as a positive control for immunogenic cell death. Cell viability assays showed that the nanocarrier performed well in its cytotoxic function when excited by light, leading to the production of reactive oxygen species. Immunostaining for confocal microscopy and transmission electron microscopy demonstrated that the treatment induced the production of DAMPs. After treatment of B16-F10 cells, the production of autophagosomes and cytokines such as IL-12 was observed, playing a significant role in the immunological response. Evaluation of dendritic cells by microscopy showed morphological changes after co-culture with treated tumor cells. Additionally, dendritic cells exhibited increased expression of membrane components such as MHCII and CD86, as well as production of cytokines such as IL-12 and IFN-γ, which are important factors for immune system activation. In conclusion, the results indicate that the established protocol with the nanostructure has the potential to improve PDT efficacy by promoting immunogenic cell death and inducing phenotypic changes in dendritic cells, indicative of their activation.Faculdade de Medicina (FMD)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularBao, Sonia NairSimoes, Marina Mesquita2024-09-03T19:50:12Z2024-09-03T19:50:12Z2024-09-032024-01-22info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSIMOES, Marina Mesquita. Avaliação do potencial da terapia fotodinâmica associada ao nanocarreador AlPcNLS na modulação de morte celular imunogênica em melanoma murino in vitro. 2024. 72 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2024.http://repositorio.unb.br/handle/10482/50291porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-09-03T19:50:12Zoai:repositorio.unb.br:10482/50291Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-09-03T19:50:12Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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