Efeitos da senescencia na resposta imune de células pulpares humanas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Farias, Jade Ormondes de
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/46218
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2022.
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spelling Efeitos da senescencia na resposta imune de células pulpares humanasSenescência celularPolpa dentáriaCapeamento da polpaDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2022.A senescência celular é um estado celular decorrente do envelhecimento e estresse crônico caracterizado principalmente por um estado permanente de parada do ciclo celular. Evidências indicam que a senescência pode afetar funções importantes como capacidade de defesa e reparo da polpa dentária, funções primordiais em tratamentos endodônticos conservadores. Esse trabalho objetivou avaliar as possíveis alterações morfológicas, além de alterações na capacidade migratória e proliferativa e efeitos na resposta imune de células da polpa dentária humana em estado de senescência. Inicialmente, as células foram tratadas com doxorrubicina para indução da senescência e a confirmação da indução foi realizada por meio de coloração de β-galactosidase. Em seguida, as alterações morfológicas foram avaliadas por meio de microscopia eletrônica de varredura, a proliferação através da contagem das células não coradas pelo azul de tripano e a migração pelo método Scratch. As alterações na resposta imune foram avaliadas por meio da dosagem dos genes de citocinas pró inflamatórias fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina 6 (IL-6) e citocinas anti-inflamatórias fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-β1) e interleucina 10 (IL-10) utilizando o ensaio de PCR. Para esse ensaio foi simulada uma situação de resposta inflamatória in vitro utilizando estímulos de lipopolissacarideo (LPS) e interferon-gama (IFN-γ). Todos os ensaios foram realizados em triplicata técnica e biológicas e os dados obtidos foram submetidos a posterior análise estatística. Os resultados demonstraram alterações na morfologia evidenciando um aumento em relação ao tamanho celular e uma diminuição no número de prolongamentos das células senescentes, em relação ao grupo não senescente; além de uma redução na capacidade proliferativa e migratória. Em adição, observou-se um aumento na expressão gênica das citocinas TNF-α e IL-6 e uma redução na expressão gênica de IL-10 e TGF-β1 por células senescentes em comparação com células saudáveis. Em suma, a senescência demonstrou afetar a morfologia celular, reduzir a capacidade proliferativa e migratória, além de evidenciar um aumento da expressão de genes relacionados a inflamação e redução nos genes anti-inflamatórios, sugerindo uma situação inflamatória exacerbada associada a imunossupressão. Desta forma, a senescência celular possivelmente é um estado que afeta o prognóstico de tratamentos endodônticos conservadores pois afeta funções celulares primordiais relacionadas a esse tratamento.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF) e Fundação de Apoio ao Desenvolvimento do Ensino, Ciência e Tecnologia do Estado de Mato Grosso do Sul (FUNDECT).Cellular senescence is a cellular state resulting from aging and chronic stress characterized mainly by a permanent state of cell cycle arrest. Evidence indicates that senescence can affect essential functions such as defense capacity and dental pulp repair and consequently affect the success of conservative endodontic treatments. This work aimed to evaluate the possible morphological changes, in addition to changes in the migratory and proliferative capacity and effects on the immune response of human dental pulp cells in a state of senescence. Initially, cells were treated with doxorubicin to induce senescence and confirm induction using β-galactosidase staining. Then, morphological alterations were evaluated by scanning electron microscopy, proliferation by counting cells not stained by trypan blue, and migration by the Scratch method. Changes in the immune response were evaluated by measuring the genes for pro-inflammatory cytokines tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 6 (IL-6) and anti-inflammatory cytokines transforming growth factor beta 1 (TGFβ1) and interleukin 10 (IL-10) using the PCR assay. For this assay, an in vitro inflammatory response situation was simulated using lipopolysaccharide (LPS) and interferon-gamma (IFN-γ) stimuli. All assays were performed in technical and biological triplicate and the data obtained were submitted to subsequent statistical analysis. The results showed differences in morphology, an increase in cell size and a decrease in the number of extensions of senescent cells in the healthy control group, and a reduction in the proliferative and migratory capacity. In addition, there was an increase in the gene expression of the inflammatory cytokines TNF-α and IL-6 and a decrease in the gene expression of IL-10 and TGF-β1 by senescent cells compared to healthy cells. In short, senescence affects cell morphology, reduces proliferative and migratory capacity, increases inflammation-related genes' expression, and lowers anti-inflammatory genes, suggesting an exacerbated inflammatory situation associated with immunosuppression. Thus, cellular senescence is possibly a condition that affects the prognosis of conservative endodontic treatments, as it affects primordial cellular functions related to this treatment.Faculdade de Ciências da Saúde (FS)Programa de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeRezende, Taia Maria Bertojadeormondes@gmail.comFarias, Jade Ormondes de2023-07-31T18:30:36Z2023-07-31T18:30:36Z2023-07-312022-12-08info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFARIAS, Jade Ormondes de. Efeitos da senescencia na resposta imune de células pulpares humanas. 2022. 81 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/46218porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-02-06T20:33:22Zoai:repositorio.unb.br:10482/46218Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-02-06T20:33:22Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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