Imitadores sintéticos de miR-7 na potencialização de efeitos in vitro do paclitaxel em células de carcinoma humano de mama e ovário

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cunha, Stefanny de Fátima Guedes
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/38747
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2020.
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spelling Imitadores sintéticos de miR-7 na potencialização de efeitos in vitro do paclitaxel em células de carcinoma humano de mama e ovárioCâncer de mamaCâncer de ovárioDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2020.O câncer de mama é a segunda neoplasia maligna mais frequente e a mais comum em mulheres. O câncer epitelial de ovário, apesar de não estar entre as neoplasias malignas mais incidentes, é considerado o câncer ginecológico com maior índice de mortalidade do mundo. O tratamento padrão para esses tipos tumorais é baseado em terapias combinadas com uso de taxanos como o paclitaxel que, apesar de amplamente utilizado, pode causar efeitos adversos que afetam a qualidade de vida do paciente, bem como perder efetividade face à resistência das células tumorais, fatores que comprometem a terapêutica da doença. Estudos baseados em RNA de interferência (RNAi) mostram que microRNAs são alvos promissores para o tratamento do câncer devido à sua capacidade de controlar pós-transcricionalmente a expressão gênica de mensagens importantes para a carcinogênese. Neste sentido, miR-7 se destaca como supressor tumoral em diversos tipos de cânceres e a sua baixa expressão está relacionada com a alta atividade de genes envolvidos em vias de sinalização, proliferação celular e metástase. Assim, a reposição do conteúdo deste microRNA em células cancerosas, por meio de imitadores sintéticos, representa uma nova abordagem terapêutica da doença. No presente estudo, objetivou-se dar continuidade aos trabalhos do grupo sobre a capacidade do imitador sintético de miR7 (miR-7 mimics) em sensibilizar células para os efeitos do paclitaxel. Foram estudadas células de tumor mamário triplo-negativo MDA-MB-231 e de tumor epitelial de ovário A2780. A viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico de MTT e a análise morfológica por meio de microscopia óptica e de fluorescência. O tipo de morte celular foi analisado por citometria de fluxo por marcação de Anexina-V/PI. Espécies reativas de oxigênio foram quantificadas por DCFH-DA e CellROX Green Reagent. A associação simultânea entre paclitaxel (100nM) e miR-7 mimic (10nM) (PTX+miR-7) induziu efetiva redução na viabilidade celular das duas linhagens estudadas, comparativamente ao uso isolado do paclitaxel. Na linhagem MDA-MB-231 o tratamento PTX+miR-7 causou alterações morfológicas significativas na superfície das membranas plasmáticas, com aspecto mais rugoso/esponjoso, sugerindo perda de estabilidade das mesmas. Na linhagem A2780 a associação de paclitaxel a miR-7 resultou em alterações morfológicas semelhantes às vistas com o PTX isolado, havendo ainda redução do número de células e menor quantidade de células aderidas ao poço. Nas duas linhagens estudadas foi possível observar aumento do volume e fragmentação do núcleo da célula. A terapia combinada (PTX+miR-7) elevou majoritariamente o percentual de morte celular por apoptose em ambas as linhagens celulares, quando comparada ao quimioterápico isolado (PTX). Os dados mostram que a apoptose por miR-7 mimics é acompanhada de aumento significativo no estresse oxidativo (ROS) das células tumorais de mama MDA-MB-231. De forma oposta, os resultados sugerem que o mecanismo de miR-7 mimic para potencializar a citotoxicidade do paclitaxel não está relacionado ao aumento significativo de estresse oxidativo nas células tumorais de ovário A2780. Os resultados do presente estudo permitem concluir que o uso de imitador sintético de miR-7 em associação a paclitaxel representa abordagem promissora na terapêutica dos cânceres de mama triplonegativos e de ovário, colocando-se em perspectiva testes pré-clínicos para análise de eficácia e segurança.FINEP, CAPES, CNPq, FAPDFBreast cancer is the most common cancer in women worldwide and the second most common cancer overall. Despite not being among the most incident oncology disorders, ovarian cancer is the leading cause of death among gynecologic tumors. Chemotherapy based on taxanes such paclitaxel holds satisfactory anticancer efficacy. However, the inherent side effects of systemic therapy and drug resistance bring additional difficulties in the patient’s medical, impacting the cancer progression. Studies based on RNA interference (RNAi) have revealed that microRNAs are promising targets for cancer treatment due to its ability to control genes expressed during the carcinogenesis process and potentiate, in addition, conventional antineoplastic drugs. In such sense, miR-7 have been described as tumor suppressor in several cancer types by exerting an RNAimediated silencing of oncogenes involved in cell signaling, tumor growth, and metastasis. Targeting specific microRNAs aberrantly expressed in cancer cells represents a wide avenue for drug development in oncology. In the present study, we aimed to continue previous work that evaluated whether miR-7 mimics could sensitize cancer cells to the effects of paclitaxel. MDA-MB-231 (triple-negative breast tumor cells) and A2780 (ovarian epithelial tumor cells) were studied. Cell viability was determined by MTT colorimetry assays, and morphological changes by optical and fluorescence microscopy. We examined cell death by flow cytometry using Annexin-V/PI staining. Reactive oxygen species (ROS) were quantified by DCFH-DA and CellROX Green Reagent. Our study found that an association between paclitaxel (100nM) and miR-7 mimic (10nM) (PTX + miR-7) causes a significant reduction in cell viability of both cell lines, in comparison to free paclitaxel. PTX + miR-7 treatment also induced significant morphological changes that might affect the stability of MDA-MB-231 cell membranes. In the ovarian cancer cell line (A2780), the combined treatment with paclitaxel and miR7 resulted in morphological changes similar to those seen with free PTX. We observed in both cell lines an increase in volume and nuclear fragmentation. Combined therapy (PTX + miR-7) enhanced the percentage of cell death due to apoptosis in both cell lines, when compared to chemotherapy alone (PTX). In addition, our results indicate that apoptosis by miR-7 mimics is followed by a significant increase in ROS content in breast tumor cells MDA-MB-231. In contrast, miR-7 mimic mechanism to potentiate the paclitaxel cytotoxicity was not related to the significant increase in oxidative stress in A2780 ovarian tumor cells. Our results point miR-7 as a promising approach for gene therapy of breast and ovarian cancers and merits further investigation in pre-clinical models of the disease.Corrêa, José RaimundoCorrêa, José Raimundostefannycunha@hotmail.comCunha, Stefanny de Fátima Guedes2020-07-02T13:40:43Z2020-07-02T13:40:43Z2020-03-03info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfCUNHA, Stefanny de Fátima Guedes.Imitadores sintéticos de miR-7 na potencialização de efeitos in vitro do paclitaxel em células de carcinoma humano de mama e ovário. 2020. 75 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020.https://repositorio.unb.br/handle/10482/38747A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-13T18:07:38Zoai:repositorio.unb.br:10482/38747Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-13T18:07:38Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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