Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Carmo, Natalia Gurgel do
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/24360
http://dx.doi.org/10.26512/2017.06.T.24360
Resumo: Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017.
id UNB_f505cc03013211889bb5d215533a369e
oai_identifier_str oai:repositorio.unb.br:10482/24360
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumoraisCélulas cancerosasVesículas extracelularesMicroRNAMamas - câncerTese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017.Exossomos e microvesículas fazem parte das vesículas extracelulares. Estas são produzidas e liberadas por uma variedade de tipos celulares, inclusive em sobrenadante do meio celular, e estão presentes em diferentes fluidos biológicos. Elas podem carregar mRNA e miRNA, dentre outras moléculas. No câncer, os miRNA associados às vesículas extracelulares estão relacionados com a comunicação entre as células tumorais e o microambiente tumoral. Este estudo avaliou a presença das proteínas relacionadas com a maquinaria de processamento de miRNA, nas vesículas extracelulares secretadas pelas linhagens celulares MDA-MB231 (câncer de mama humano) e fibroblasto humano no tempo de crescimento celular de 72 horas. Para purificar estas partículas foi utilizado o método de centrifugação diferencial e ultracentrifugação. Após isto, caracterizou-se as vesículas pelo seu tamanho e distribuição de partículas utilizando a resistência de pulso, pelo sistema qNANO. Para a detecção de proteínas, a técnica de western blot foi realizada a fim de se identificar a presença das proteínas de interesse. Como resultado, as vesículas extracelulares provenientes dos sobrenadantes das linhagens celulares foram purificadas e caracterizadas pelo seu tamanho adequadamente. Observou-se também que a quantidade de partículas de vesículas extracelulares da linhagem tumoral obtida pelo sistema qNANO, foi superior quando comparada à amostra não-tumoral. Os resultados da detecção de proteínas por western blot demonstram que as proteínas Dicer, Ago2 e TRBP2 estão presentes na amostra proveniente da linhagem tumoral MDA-MB231. Confirmou-se a presença de proteínas TSG101, Alix, CD63 - marcadoras moleculares de vesículas extracelulares. Confirmou-se também ausência nas amostras, da proteína Calnexina, a qual é controle negativo e é indicativo de contaminação nas vesículas extracelulares. Por fim, foram identificadas em ambas as amostras as proteínas ApoA-IV, AQP2 e IL-6, as quais estão associadas ao microambiente tumoral na sinalização do miRNA. Conclui-se que as proteínas Dicer, Ago2 e TRBP2, pertencentes a maquinaria de processamento de miRNA, bem como proteínas ainda não discutidas pela literatura em vesículas extracelulares na linhagem tumoral estudada, estão presentes no sobrenadante da linhagem tumoral MDA-MB231, sugerindo um papel para essas moléculas na biologia tumoral.Exossomes and microvesicles are part of the extracellular vesicles. There are produced and released by a variety of cell types, including cell media supernatant, and be present in different biological fluids. They can carry mRNA and miRNA, among other molecules. In cancer, miRNAs associated with extracellular vesicles are related to the communication between tumor cells and the tumor microenvironment. This study evaluated the presence of proteins related to the miRNA processing machinery in the extracellular vesicles secreted by cell lines MDA-MB231 (human breast cancer) and human fibroblast at cell growth time of 72 hours. Purification of the culture medium supernatant was carried out by the differential ultracentrifugation method. After this, the vesicles were characterized by their size and particle distribution using the pulse resistance by qNANO system. For the detection of proteins, the western blot technique was performed to identify the presence of the proteins of interest. As a result, extracellular vesicles from cell line supernatants were purified and characterized by their size appropriately. It was also observed that the number of extracellular vesicles particles of the tumor lineage obtained by qNANO system was superior when compared to the nontumor sample. The results of western blot detection of proteins demonstrate that Dicer, Ago2 and TRBP2 proteins, related to miRNA processing machinery, are present in the sample from the MDA-MB231 tumor line. We confirmed the presence of TSG101, Alix, CD9 – which are extracellular vesicle molecular marker proteins. Also, we confirmed in both samples the absence of Calnexin, which is a negative control, it is indicative of contamination in the extracellular vesicles. Lastly, we identified in both samples ApoAIV, AQP2 and IL-6 proteins which are associated with tumor microenvironment in miRNA signaling. In conclusion, Dicer, Ago2 and TRBP2 proteins belonging to miRNA processing machinery, as well as proteins not yet discussed in the literature in extracellular vesicles from tumor cell, were present in the supernatant of the MDAMB231 tumor cell, suggesting a role for these molecules in tumor biology.Faculdade de Medicina (FMD)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularPereira, Rinaldo WellersonCarmo, Natalia Gurgel do2017-08-31T19:05:01Z2017-08-31T19:05:01Z2017-08-312017-06-19info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfCARMO, Natalia Gurgel do. Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais. 2017. 85f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2017.http://repositorio.unb.br/handle/10482/24360http://dx.doi.org/10.26512/2017.06.T.24360A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-09-24T21:35:11Zoai:repositorio.unb.br:10482/24360Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-09-24T21:35:11Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.none.fl_str_mv Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
title Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
spellingShingle Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
Carmo, Natalia Gurgel do
Células cancerosas
Vesículas extracelulares
MicroRNA
Mamas - câncer
title_short Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
title_full Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
title_fullStr Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
title_full_unstemmed Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
title_sort Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais
author Carmo, Natalia Gurgel do
author_facet Carmo, Natalia Gurgel do
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Pereira, Rinaldo Wellerson
dc.contributor.author.fl_str_mv Carmo, Natalia Gurgel do
dc.subject.por.fl_str_mv Células cancerosas
Vesículas extracelulares
MicroRNA
Mamas - câncer
topic Células cancerosas
Vesículas extracelulares
MicroRNA
Mamas - câncer
description Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017.
publishDate 2017
dc.date.none.fl_str_mv 2017-08-31T19:05:01Z
2017-08-31T19:05:01Z
2017-08-31
2017-06-19
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv CARMO, Natalia Gurgel do. Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais. 2017. 85f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2017.
http://repositorio.unb.br/handle/10482/24360
http://dx.doi.org/10.26512/2017.06.T.24360
identifier_str_mv CARMO, Natalia Gurgel do. Avaliação de proteínas do processamento de microRNA de vesículas extracelulares provenientes de linhagens celulares tumorais. 2017. 85f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2017.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/24360
http://dx.doi.org/10.26512/2017.06.T.24360
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv repositorio@unb.br
_version_ 1814508373050130432

Registros relacionados