Papel do ergosterol na ativação de macrófagos infectados in vitro com o Cryptococcus neoformans

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Simões, Viviann Christina Rebouças
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/50300
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2023.
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spelling Papel do ergosterol na ativação de macrófagos infectados in vitro com o Cryptococcus neoformansCryptococcus neoformansMacrófagosErgosterolDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2023.O ergosterol é um componente da membrana fúngica que auxilia na proteção contra estresses oxidativos e resistência a estresses ambientais, além de ser um alvo importante na terapia antifúngica. A deleção de genes da via do ergosterol demonstrou interferência na sobrevivência e na virulência de diversos fungos. A fim de entender melhor como a ausência do Ergosterol pode interferir na sobrevivência do C. neoformans e na ativação da resposta imunológica, avaliamos a termosusceptibilidade da linhagem nocaute, e a resposta imunológica de macrófagos provenientes da medula óssea de camundongos (BMDM) ao interagir com o mutante. Também utilizamos as vesículas extracelulares (EVs) lisadas e intactas do mutante e do selvagem para avaliar a ativação da resposta imunológica. O mutante Δerg6 possui em sua membrana outros lipídeos como Lanosterol e Esqualeno, então avaliamos também se esses lipídeos podem ativar a resposta imunológica utilizando nanopartículas com os lipídeos incorporados durante a interação com BMDM. Os resultados demonstraram que o mutante Δerg6 sobrevive a 37°C, porém não é capaz de proliferar nessa temperatura. Também mostramos que o mutante é capaz de estimular a resposta imunológica com a dosagem das citocinas IL-1b, TNF-a e IL-6 e de Óxido Nítrico, mas em menores níveis que a cepa selvagem. Também encontramos resultados parecidos na interação com as EVs intactas do mutante e do selvagem com BMDM. Entretanto, as EVs produzidas pelo mutante Δerg6 quando lisadas, estimulam maior produção de citocinas do que as EVs lisadas da linha selvagem, sugerindo a presença de diferentes componentes nas EVs dos mutantes. Demonstramos que as nanopartículas com os lipídeos presentes na membrana causam a morte celular dos BMDM, porém com baixa capacidade de induzir a produção das citocinas avaliadas neste trabalho. Dessa forma, conseguimos demonstrar que o mutante Δerg6 permanece viável à temperatura corporal humana, mas sem capacidade de proliferação, e é capaz de produzir EVs que são capazes de estimular a ativação da resposta imune em BMDM.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).Ergosterol is a fungal membrane component that assists in the protection against oxidative stress and resistance to environmental stress, besides being an important target in antifungal therapy. Genes deletion from Ergosterol pathway demonstrated interference in the survival and virulence of several fungi. In order to better understand how the Ergosterol absence can interfere in the C. neoformans survival and in the immune response activation, we evaluated the thermosusceptibility of the Δerg6 mutant, which had the ERG6 gene deleted, and the immune response of macrophages from the bone marrow of mice (BMDM) when interacting with the mutant and comparing with the wild-type H99 strain. We also used lysed and intact extracellular vesicles (EVs) from the mutant and wild mice. The Δerg6 mutant has other lipids such as Lanosterol and Squalene whether these lipids can activate the immune response using nanoparticles with incorporated lipids. The results showed that the Δerg6 mutant survives at 37°C, althought it is not able to proliferate at this temperature. We also showed that the mutant is capable of stimulating the immune response with dosages of Nitric Oxide and IL-1b, TNF-a and IL-6 cytokines, but at lower levels than the wild-type strain. We also observed similar results in the interaction with intact mutante EVs and wild with BMDM. However, the EVs produced by the Δerg6 mutant, when lysed, stimulate greater cytokine production than the EVs lysed from H99. We demonstrated that nanoparticles with membrane lipids cause BMDM cell death by Lactate Dehydrogenase (LDH) dosages, even at low concentrations of lipids in nanoparticles. In this way, we managed to evaluate that the Δerg6 mutant remains viable at human body temperature, but without proliferation capacity, and is capable of producing EVs that are capable of stimulating the immune response activation in BMDM.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularBocca, Anamélia LorenzettiSimões, Viviann Christina Rebouças2024-09-03T19:50:15Z2024-09-03T19:50:15Z2024-09-032023-04-20info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSIMÕES, Viviann Christina Rebouças. Papel do ergosterol na ativação de macrófagos infectados in vitro com o Cryptococcus neoformans. 2023. 65 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2023.http://repositorio.unb.br/handle/10482/50300porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2025-01-15T19:27:39Zoai:repositorio.unb.br:10482/50300Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2025-03-24T10:34:14.222018Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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