Caracterização da expressão de WFDC1/ps20 e de sua isoforma delta 3 em diferentes tecidos : Characterization of WFDC1/ps20 and its delta 3 isoform expression in different tissues

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Marcilio, Tone Vander, 1983-
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1639794
Resumo: Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho
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spelling Caracterização da expressão de WFDC1/ps20 e de sua isoforma delta 3 em diferentes tecidos : Characterization of WFDC1/ps20 and its delta 3 isoform expression in different tissuesCharacterization of WFDC1/ps20 and its delta 3 isoform expression in different tissuesProteína 1 do domínio central WAP de quatro dissulfetosWAP four-disulfide core domain protein 1Orientador: Hernandes Faustino de CarvalhoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A próstata é uma glândula composta por tecido epitelial circundado em componentes de tecido estromal. Os principais tipos de células no estroma prostático incluem fibroblastos, miofibroblastos e células muscular lisa. Esta última é o principal componente do estroma prostático, sendo as responsáveis pela contração da glândula durante a ejaculação e, além disso, criam um ambiente propício para a manutenção do epitélio em situações normal e patológica. A proteína estromal da próstata ps20 é sintetizada como produto da expressão do gene WFDC1 em células musculares lisas da próstata. Ela atua como reguladora de crescimento, mediadora das interações entre estroma-epitélio e é importante para a manutenção da homeostase tecidual. Neste trabalho foram selecionados alguns órgãos de camundongos adultos como pulmão, estômago, cólon, bexiga, próstata e ovário, posteriormente submetidos a três ensaios distintos para identificar e caracterizar a expressão do gene WFDC1/ps20 em níveis de mRNA e proteína. No ensaio de PCR, todas as amostras apresentaram o mRNA para isoforma W e para a delta 3, sendo que apenas nas amostras de próstata e ovário esta última não foi detectada. Para a detecção da proteína por Western blot as duas isoformas apresentaram múltiplas espécies com massas moleculares distintas e acima do que é conhecido para a ps20. Sugerimos que este resultado esteja relacionado à atividade da enzima dependente de cálcio, transglutaminase 2 (TG2), responsável pelo crosslink entre duas ou mais proteínas. E, ainda, amostras de estômago para a isoforma delta 3, foi detectada uma banda resolvida na altura de 17 kDa. Aqui sugerimos um evento de clivagem da extremidade C-teminal da ps20 delta 3 pela ação da enzima catepisina L. Na imunofluorescência as imagens exibiram a presença das duas isoformas da proteína estromal da próstata (ps20) nos órgãos analisados, no entanto, a expressão da isoforma delta 3 parece estar reduzida comparada à isoforma W, sugerindo que os tecidos analisados expressam mais a isoforma W. Em imagens obtidas no ensaio de imunofluorescência foi detectada a isoforma delta 3 em núcleo de células uroteliais da bexiga e em células epiteliais e estromais da próstata, caracterizando um dado novo relacionado à localização desta isoforma da proteínaAbstract: The prostate is a gland composed of epithelial tissue circled into stromal tissue components. The main types of cells in the prostatic stroma include fibroblasts, myofibroblasts and smooth muscle cells. The smooth muscle cells are the main components of the prostatic stroma, being responsible for the contraction of the gland during ejaculation and, furthermore, create a favorable environment for the maintenance of the epithelium in normal and pathological situations. The prostate stromal protein ps20 is synthesized as a product of the expression of the WFDC1 gene in smooth prostate muscle cells. It acts as a growth regulator, mediator of the stroma-epithelium interaction and it is important for the maintenance of the tissue homeostasis. In this work, we selected some organs of adult mice such as lung, stomach, colon, bladder, prostate and ovary, which were subsequently subjected to three different tests to identify and characterize the expression of the WFDC1 / ps20 gene in the levels of mRNA and protein. In the PCR assay, all samples presented the mRNA for the W and delta 3 isoforms, however, in the prostate and ovary samples the isoform delta 3 was not detected. For the detection of the protein by Western blot, the two isoforms presented multiple species with different molecular masses and above what is known for ps20. We suggest that this result is related to the activity of the calcium-dependent enzyme, transglutaminase 2 (TG2), responsible for the crosslink between two or more proteins. In addition, stomach samples it was detected a band of 17 kDa for the delta 3 isoform, suggesting an event of cleavage of its C-terminal end by the action of the enzyme cathepsin L (CL). Immunofluorescence images showed the presence of the two isoforms of the stromal prostate protein (ps20) in the analyzed organs. However, the expression of the delta 3 isoform seems to be reduced compared to the W isoform, suggesting that the analyzed tissues express more the isoform W. In addition, the delta 3 isoform was detected in the nucleus of urothelial cells of the bladder and in the epithelial and stromal cells of the prostate; this nuclear expression of this isoform was not characterized beforeMestradoBiologia CelularMestre em Biologia Celular e EstruturalCAPES001[s.n.]Carvalho, Hernandes Faustino de, 1965-Santos, Aline Mara dosBiancardi, Manoel FranciscoUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biologia Celular e EstruturalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASMarcilio, Tone Vander, 1983-20202020-08-11T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online ( 51 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1639794MARCILIO, Tone Vander. Caracterização da expressão de WFDC1/ps20 e de sua isoforma delta 3 em diferentes tecidos: Characterization of WFDC1/ps20 and its delta 3 isoform expression in different tissues . 2020. 1 recurso online ( 51 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1639794. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1149433Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2020-10-13T12:09:19Zoai::1149433Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2020-10-13T12:09:19Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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