Caracterização e avaliação da atividade de células endoteliais formadoras de colônia (CEFCs) em pacientes com trombose venosa profunda aguda

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Letícia Queiroz da, 1994-
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/4970
Resumo: Orientador: Joyce Maria Annichino Bizzacchi
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spelling Caracterização e avaliação da atividade de células endoteliais formadoras de colônia (CEFCs) em pacientes com trombose venosa profunda agudaThe role of endothelial colony-forming cells (ECFCs) in acute deep vein thrombosis patientsDisfunção endotelialTrombose venosaCélulas endoteliaisEndothelial dysfunctionDeep vein thrombosisEndothelial cellsOrientador: Joyce Maria Annichino BizzacchiTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A Trombose Venosa Profunda (TVP) é definida como um processo patológico resultante da alteração da parede do vaso, do fluxo sanguíneo, e/ou da composição sanguínea, o que leva à formação de um trombo dentro do vaso. Apesar do conhecimento atual, ainda há muito a se avançar no conhecimento dos fatores de risco associados à TVP. O endotélio vascular ao responder ativamente a estímulos fisiopatológicos, pode alterar seu padrão antitrombótico, e com a perda de sua integridade, liberar células endoteliais circulantes (CECs), que vêm sendo consideradas como possíveis marcadores para diversas doenças. Além disso, as células endoteliais formadoras de colônia (CEFCs) são um subtipo de células endoteliais progenitoras com notável potencial clonogênico e capacidade de vascularização in vivo, e devido a essas características de natureza endotelial, vem ganhando destaque a sua utilização como modelo ex vivo na investigação de doenças. Contudo, apesar do endotélio possuir um papel-chave na hemostasia, nenhum estudo avaliou as CEFCs na TVP aguda. Além disso, a impossibilidade de uma análise direta do endotélio, dificulta a compreensão do seu real papel na doença. Sendo assim, o objetivo principal deste trabalho foi caracterizar e avaliar a função celular das CEFCs de pacientes com TVP aguda em comparação à indivíduos saudáveis (CN). Os pacientes foram selecionados após a confirmação do diagnóstico de TVP de membros inferiores no período de julho de 2019 a setembro de 2021. A casuística foi constituída de 25 pacientes com TVP aguda (idade média 45 ± 13 anos), sendo que 20 retornaram para a segunda coleta (TVP >6 meses) e 38 CN (idade média 36 ±10 anos). Segregamos as avaliações em 2 grupos: (1) avaliação descritiva e laboratorial de pacientes com TVP aguda, TVP >6 meses e controles normais (CN) e (2) avaliação da função endotelial e parâmetros biológicos, com caracterização das células por imunofenotipagem e porcentagem de células senescentes, proliferação, apoptose, migração celular e capacidade de geração de trombina (TGT), comparadas ao CN. Também realizamos uma subanálise para a identificação de marcadores biológicos envolvidos no sucesso da obtenção de CEFCs previamente isoladas a partir do sangue periférico e expandidas em cultura. Como resultados, no grupo 1 demonstramos um aumento plasmático nas interleucinas (IL) pró-inflamatórias IL-6, IL-8, do fator de crescimento derivado plaquetário (PDGF-AA/AB) e da molécula de adesão P-selectina, e uma maior frequência de CECs nos pacientes com TVP aguda em relação aos CNs. Observamos que na TVP >6 meses a IL-6, IL-8, P-selectina e CECs estavam diminuídos em comparação à TVP aguda, porém observamos um aumento da Molécula de adesão intercelular solúvel 1 (sICAM-1) e Molécula de adesão vascular solúvel 1 (sVCAM-1). Quanto ao grupo 2, o sucesso na obtenção das CEFCs foi de 37% no grupo CN, 20% na TVP aguda e 25% na TVP >6 meses. Os testes de função celular das CEFCs em pacientes com TVP aguda vs. CN revelou células com menor capacidade proliferativa e de migração, e mais células em apoptose. Já o TGT demonstrou células com propriedades similares entre os grupos. As análises do sobrenadante celular evidenciaram o aumento da expressão de IL-6 nas CEFCs de pacientes com TVP aguda. Ainda não temos a finalização desses testes na TVP >6 meses para comparação da TVP em dois momentos distintos. Por fim, alguns fatores parecem estar envolvidos no surgimento e manutenção do cultivo celular, como o aumento de sICAM-1 e sVCAM-1 tanto no plasma como no sobrenadante das células que foram isoladas. Como conclusão, definimos que é possível estabelecer o isolamento das CEFCs em pacientes com TVP aguda, no entanto com baixas taxas de sucesso, e isso pode ser atrelado aos achados deste trabalho em relação a alteração das propriedades funcionais, principalmente na capacidade replicativa e de reparo celular. No mais, acreditamos que as células também podem ser afetadas com o ambiente extracelular na fase aguda frente à estímulos pró-inflamatóriosAbstract: Deep Vein Thrombosis (DVT) is defined as a pathological process resulting from changes in the vessel walls, blood flow, and/or blood composition, which leads to the formation of a thrombus within the vessel. Despite current knowledge, much remains to be understood about the risk factors associated with DVT. When the vascular endothelium actively responds to pathophysiological stimuli, the antithrombotic pattern of this endothelium can change; and with the loss of integrity, occurs a release of endothelial cells (CECs), which have been considered possible markers for several diseases. In addition, endothelial colony-forming cells (ECFCs) are a subtype of endothelial progenitor cells with remarkable clonogenic potential and in vivo vascularization capacity, and due to these characteristics of endothelial nature, are being used as an ex vivo model in disease investigation. However, despite the endothelium playing a key role in hemostasis, no study has evaluated the ECFCs in acute DVT. In addition, the impossibility of a direct analysis of the endothelium makes the actual role of the endothelium in the disease difficult to understand. Therefore, the main objective of this work was to characterize and evaluate the cellular function of the ECFCs of patients with acute DVT compared to healthy individuals (controls, CN). Patients were selected after confirmation of the diagnosis of DVT of the lower limbs from July 2019 to September 2021. The groups consisted of 25 patients with acute DVT (mean age 45 ± 13 years), with 20 follow-ups (DVT>6 months) and 38 HI (mean age 36 ±10 years). We divided the assessments into 2 groups: (1) descriptive and laboratory assessment of patients with acute DVT, DVT >6 months, and HI; and (2) evaluation of endothelial function and biological parameters, with the characterization of cells by immunophenotyping and percentage of senescent cells, proliferation, apoptosis, cell migration, and thrombin generation capacity (TGT), compared to HI. In addition, we performed a sub analysis for the identification of biological markers involved in the success of obtaining ECFCs previously isolated from peripheral blood and expanded in culture. As a result, in group 1 we demonstrated a plasmatic increase of the pro-inflammatory interleukins (IL) IL-6, IL-8, platelet-derived growth factor (PDGF-AA/AB), and P-selectin adhesion molecule, and a higher frequency of ECs in patients with acute DVT compared to HI. Thus, we observed that in DVT >6 months IL-6, IL-8, P-selectin, and CECs were decreased compared to acute DVT, however, we observed an increase in Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1 (sICAM-1) and Vascular Adhesion Molecule soluble 1 (sVCAM-1). In group 2, success in obtaining CEFCs was 37% in the HI group, 20% in the acute DVT, and 25% in the DVT >6 months. Cell function tests of ECFCs in patients with acute DVT vs. HI revealed cells with lower proliferative and migratory capacity, and more cells in apoptosis. TGT showed cells with similar properties between groups. Cell supernatant analyzes showed an increase in IL-6 expression in the ECFCs of patients with acute DVT. We have yet to complete these tests at DVT >6 months to compare DVT at two different times. Finally, some factors appear to be involved in the emergence and maintenance of cell culture, such as the increase in sICAM-1 and sVCAM-1 both in plasma and in the supernatant of cells that were isolated. In conclusion, we defined that it is possible to establish the isolation of ECFCs in patients with acute DVT, however with low success rates, and this can be linked to the findings of this work regarding the change in functional properties, especially in the replicative and regenerative capacity. Furthermore, we believe that cells can also be affected by the extracellular environment in the acute phase in the face of pro-inflammatory stimulDoutoradoFisiopatologia MédicaDoutora em CiênciasFAPESP2018/15618-3 ; 2016/14172-6CAPES001[s.n.]Annichino-Bizzacchi, Joyce Maria, 1957-Duarte, Bruno Kosa LinoDe Paula, Erich ViniciusRuas, Luciana PereiraOliveira, Carolina CaliariUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASSilva, Letícia Queiroz da, 1994-20222022-04-26T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (109 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/4970SILVA, Letícia Queiroz da. Caracterização e avaliação da atividade de células endoteliais formadoras de colônia (CEFCs) em pacientes com trombose venosa profunda aguda. 2022. 1 recurso online (109 p.) 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