Purificação e caracterização de uma proteina (SIII-3rp) do veneno de Bothrops alternatus que se liga ao fator de von Willebrand (vwF)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Novello, Jose Camillo, 1955-2022
Data de Publicação: 1995
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1582692
Resumo: Orientador: Benedito de Oliveira Filho
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spelling Purificação e caracterização de uma proteina (SIII-3rp) do veneno de Bothrops alternatus que se liga ao fator de von Willebrand (vwF)VenenosProteínasHemostaseOrientador: Benedito de Oliveira FilhoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Botrocetina é uma coaglutinina de plaqueta descrita no veneno de Bothrops jararaca. Foi sugerida como um substituto para a ristocetina como medidor da interação entre o complexo GPIb-IX e o fator de von Willebrand (vWF). (Read et aI., 1978). Botrocetina de uma e duas cadeias foram descritas no veneno de B. jararaca (Fujimura et al., 1991a). A Botrocetina de duas cadeias apresenta alta homologia na sua sequência de aminoácidos com a albogreguina-B (isolada do veneno de Trimeresus albolabris), que aglutina plaquetas diretamente por se ligar à GPIb- IX de membranas de plaqueta em um sítio próximo ou identico ao do vWF (Peng et aI., 1991). Neste trabalho descrevemos a purificação e isolamento de uma proteína (SIII-3rp) do veneno de Botltrops alternatus, através de filtração em gel, cromatografia de troca ionica e HPLC em cromatografia de fase reversa em coluna C18. A proteína purificada que inibia a ligação de ristocetina ao vWF, apresentava uma única banda (28 kDa) em condições não desnaturantes quando submetida a PAGE-SDS 12,5%; após redução com DTT 0,1M foi observada uma banda com 15kDa. Microsequenciamento automático da proteína SIII-3rp foi realizado em um sequenciador automático Applied Biosystems Modelo 477 com fase de pulso liquído. A sequência N-terminal obtida foi DCPSDWSPYEG, e apresentava uma homologia de 82% com os primeiros onze resíduos das cadeias a e b da botrocetina heterodiméricaAbstract: Botrocetin is a platelet coagglutin described in Bothrops jararaca venon suggested as a substitute for ristocetin as a mediator of the interaction between GPIb-IX complex and the von Willebrand factor (vWF) that lead to platelet agglutination (Read et al., 1978). A single chain and a two chain botrocetin were described in B. jararaca venon (Fujimura et al., 1991a). Two chain botrocetin is highly homologous in its aminoacid sequence to alboaggregin-B (isolated from the venom of Trimeresus albolabris) a protein which directly agglutinates platelets by binding to a site on platelet membrane GPIb- IX dose to or identical with the site for vWF binding (Peng et al., 1991) .lu this work we report the purification and isolation of a protein (SIII3rp) from Bothrops alternatus venon, through procedures of gel filtration, ion exchange chromatography and HPLC reverse phase chromatography with a C 18 column. The purified protein which inhibits the ristocetin binding to vWF, presented a sillgle band (28 kDa) in non denaturing conditions in 12,5% PAGESDS; after reduction with 0,1M DTT, a 15kDa band was observed. Automatic microsequencing of this proteill was performed on a Applied Biosystem 477 automatic model sequencer with liquid phase pulse. The N-termillal sequence obtained DCPSDWSPYEG presented 82% homology to the first elevell residues of the a and b chains of the heterodimeric botrocetinDoutoradoBioquímicaDoutor em Ciências[s.n.]Oliveira Filho, Benedito, 1930-2020Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Ciências BiológicasUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASNovello, Jose Camillo, 1955-202219951995-08-04T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf72f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1582692NOVELLO, Jose Camillo. Purificação e caracterização de uma proteina (SIII-3rp) do veneno de Bothrops alternatus que se liga ao fator de von Willebrand (vwF). 1995. 72f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1582692. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/93450porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T02:20:56Zoai::93450Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T02:20:56Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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