Estudo da expressão polarizada da via Wnt/ß-catenina e Coup-tf2 em corpos embrioides formados a partir de células-tronco embrionárias

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Matsuguma, Aline Mika, 1992-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637181
Resumo: Orientador: Henrique Marques Barbosa de Souza
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spelling Estudo da expressão polarizada da via Wnt/ß-catenina e Coup-tf2 em corpos embrioides formados a partir de células-tronco embrionáriasAnalysis of the polarized expression of Wnt/ß-catenin pathway and Coup-tf2 in embryoid bodies derived from embryonic stem cellsCélulas-tronco embrionáriasDiferenciação celularFator II de transcrição COUPEmbryonic stem cellsCell differentiationCOUP transcription factor IIOrientador: Henrique Marques Barbosa de SouzaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Um importante evento do desenvolvimento embrionário é a gastrulação, na qual o embrião forma os três folhetos germinativos: ectoderme, mesoderme e endoderme. Esse processo é organizado por diversas vias de sinalização, diferencialmente expressas que resultam na padronização do embrião. Uma via importante para a correta gastrulação, é a via Wnt/ß-catenina, que forma um gradiente de sinalização resultando em um embrião polarizado. Durante a gastrulação, a via Wnt/ß-catenina atua segregando a ectoderme da mesendoderme e em seguida, atua na formação da mesoderme e endoderme. A polarização da sinalização da via Wnt/ß-catenina é observada tanto em embriões, quanto em corpos embrioides (CE). Em nosso laboratório foi observado que COUP-TF2, um fator de transcrição importante para a determinação de destinos celulares, se encontra polarizado em CE, assim como a via Wnt/ß-catenina. Portanto, foi de nosso interesse investigar o papel de COUP-TF2 na determinação de folhetos germinativos de CE no contexto da gastrulação. Nossos resultados mostraram que o tratamento de células-tronco embrionárias (CTE) murinas com 4MNol, molécula que inativa COUP-TF2, resultou em redução na expressão de marcadores de mesoderme (Bra(T)) e endoderme (Foxa2). Análise da expressão gênica de Axin2, gene alvo da via Wnt/ß-catenina, mostrou que não houve modulação da sinalização dessa via, sugerindo que COUP-TF2 não regula a via Wnt/ß-catenina. Adicionalmente, foi observado que a modulação da via Wnt/ß-catenina não regula a expressão de Coup-tf2 em CE humanos. No entanto, análises preliminares em CE humanos realizadas em populações de células de CE já segregadas pela via Wnt/ß-catenina em ectoderme e mesendoderme, mostraram que Coup-tf2 pode ter papel na segregação mesoderme-endoderme. Linhagens de CTE murinas nocauteadas para Coup-tf2 não mostraram alteração na expressão de marcadores de mesoderme e endoderme em CE murinos, indicando que Coup-tf2 não regula a formação desses folhetos e que os resultados encontrados no tratamento com 4MNol podem ser resultantes de uma ação inespecífica da molécula, que levaria a redução da formação de mesoderme e endoderme. Nesse trabalho, foi observado que Coup-tf2 não é essencial para a definição dos três folhetos germinativos, no contexto da gastrulação em CE murinos. No entanto, Coup-tf2 pode estar agindo em um segundo momento, na segregação da mesendoderme em mesoderme e endodermeAbstract: Gastrulation is an important event during embryonic development, in which the embryo originates three germ layers: ectoderm, mesoderm and endoderm. This process is organized by several signaling pathways that are differentially expressed, culminating in the patterning of the embryo. The Wnt/ß-catenin signaling pathway is important for the proper gastrulation. This pathway is patterned as a gradient resulting in a polarized embryo. During gastrulation, Wnt/ß-catenin signaling pathway segregates the ectoderm from the mesendoderm, then it regulates the mesoderm and endoderm formation. The Wnt/ß-catenin pathway is known to be polarized both in mice embryos and embryoid bodies (EB). Previous studies from our group showed that COUP-TF2, a transcription factor known to regulate cell fate decisions, is polarized in mice EB, resembling the Wnt/-ßcatenin pathway polarized pattern. Thus, we were interested in investigating the role of COUP-TF2 in germ layer differentiation in EB in the context of gastrulation. Our results showed that mice embryonic stem cells treated with 4MNol, a molecule that inactivates COUP-TF2, led to reduced expression of mesodermal (Bra(T)) and endodermal (Foxa2) markers. However, gene expression analysis of Axin2, a Wnt/ß-catenin pathway target gene, showed no regulation of this pathway, suggesting that COUP-TF2 does not regulate Wnt/ß-catenin signaling. Additionally, we showed that Wnt/-ß-catenin signaling modulation does not regulate Coup-tf2 expression in human EB. however, exploratory analysis of Wnt-segregated cell populations from human EB, suggested that Coup-tf2 is more expressed in Wnt-positive cells when compared to Wnt-negative cells, indicating that Coup-tf2 might have a role in mesoderm-endoderm segregation. Gene expression analysis in Coup-tf2 knockout mice EB showed that Coup-tf2 does not regulate mesoderm and endoderm formation, indicating that the regulation observed in the 4MNol treatment might be a consequence of non-specific action of 4MNol that could lead to impaired mesoderm and endoderm formation. This study showed that Coup-tf2 does not regulate germ layer formation during gastrulation in mice EB. However, Coup-tf2 might have a role in the following step, during mesendodermal differentiation in mesoderm and endodermMestradoGenética Animal e EvoluçãoMestra em Genética e Biologia MolecularCAPESFAPESP2016/13095-8[s.n.]Marques-Souza, Henrique, 1977-Massirer, Katlin BrauerCastillo, Hozana AndradeUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASMatsuguma, Aline Mika, 1992-20192019-07-02T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (61 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637181MATSUGUMA, Aline Mika. Estudo da expressão polarizada da via Wnt/ß-catenina e Coup-tf2 em corpos embrioides formados a partir de células-tronco embrionárias. 2019. 1 recurso online (61 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. 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