Efeito dos venenos de Tityus bahiensis e Tityus serrulatus na reatividade plaquetária de ratos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Morau, Mariana Vieira, 1990-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1636303
Resumo: Orientador: Sisi Marcondes Paschoal
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spelling Efeito dos venenos de Tityus bahiensis e Tityus serrulatus na reatividade plaquetária de ratosEffect of Tityus bahiensis and Tityus serrulatus crude venom on rats platelet reativityAgregação plaquetáriaTityus bahiensisTityus serrulatusCálcioPlatelet aggregationTityus bahiensisTityus serrulatusCalciumOrientador: Sisi Marcondes PaschoalDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O número de acidentes escorpiônicos no Brasil vem crescendo drasticamente nos últimos anos, especialmente, com o Tityus bahiensis (Tb) e Tityus serrulatus (Ts). Entretanto, há poucos estudos sobre o efeito dos venenos destas espécies em diferentes células, incluindo as plaquetas. Sendo assim, decidimos investigar os efeitos dos venenos de Tb e Ts em plaquetas de ratos. O presente trabalho foi aprovado pela Comissão de Ética em Pesquisa Animal da Unicamp. Foram utilizados ratos Wistar machos e, após a coleta de sangue, as plaquetas lavadas foram estimuladas com ADP (5M) ou trombina (200mU/ml), na presença, ou não, de concentrações crescentes dos venenos de T. serrulatus (1 - 100g/ml) e T. bahiensis (3 - 300g/ml) incubadas com plaquetas por intervalos de tempo de 5 - 30min. Também foi avaliada a mobilização de cálcio em plaquetas incubadas com Fluo-3Am. Os níveis intraplaquetários de AMPc, GMPc e tromboxano A2 (TXA2) foram quantificados pelo método de Elisa. A viabilidade plaquetária foi avaliada por ensaios com MTT. Os níveis de EROs intraplaquetários foram determinados por citometria de fluxo e a fosforilação de c-Src por Western blotting. A inibição da agregação plaquetária por Tb e Ts foi dependente da dose dos venenos e do tempo de incubação. A agregação induzida pelo ADP foi abolida com a incubação do veneno de Ts 100 ?g/ml por 30 min (93 ± 4% de inibição). Por outro lado, o veneno de Tb inibiu a agregação em 63 4 % na concentração de 300 ?g/ml e com mesmo tempo de incubação. A agregação induzida por trombina foi inibida em 63 4 e 67 2 % após 30 min de incubação com Tbv (300 ?g/ml) e a Tsv (100 ?g/ml), respectivamente. O efeito inibitório dos venenos na agregação não foi acompanhado pela redução da viabilidade das plaquetas. A quantidade de Ca+2 citosólica em plaquetas ativadas por ADP ou trombina, bem como a mobilização interna deste íon, não foram modificadas pela Tbv ou Tsv, entretanto, o influxo de Ca+2 foi significativamente reduzido. Além disso, a inibição da agregação por Ts (100 ?g/ml) foi acompanhada por redução na síntese de TXA2 em plaquetas ativadas por ADP (redução de 68 2 %). Os níveis de AMPc e GMPc, bem como a fosforilação de c-Src não foram modificados pela incubação por 15 min da Tbv ou Tsv com plaquetas. Portanto, nossos resultados mostram que o efeito inibitório dos venenos de Tb e Ts na agregação plaquetária independe da produção de EROs, AMPc ou GMPc e, da fosforilação de c-Src. Provavelmente, parte do efeito inibitório da Tsv é decorrente da inibição da síntese de TXA2 em plaquetas. A redução do influxo de Ca+2 em plaquetas ativadas, por ADP ou trombina, é uma via comum da Tbv e Tsv, indicando que este efeito tem um papel importante na inibição da agregação por ambos os venenosAbstract: The number of scorpion accidents in Brazil has been growing drastically in the last years, specially, with Tityus bahiensis (Tb) and Tityus serrulatus (Ts). However, there are only few studies on the effect of the venoms from these scorpions in different cells, including platelets. Thus, we decided to investigate the effects of Tb and Ts venoms on rat platelets. The present study was approved by the Ethical Principles in Animal Research adopted by the Brazilian College for Animal Experimentation (COBEA). Male Wistar rats were used and, after blood collection, washed platelets were stimulated with ADP (5 µM) or thrombin (200mU / ml), in the presence or not of increasing concentrations of T. serrulatus (1 - 100g/ml) or T. bahiensis (3 - 300g/ml) venoms, incubated with platelets for 5 ¿ 30 min. We also determined the mobilization of calcium ion in platelets incubated with the Fluo-3-Am marker. The cAMP, cGMP and the thromboxane A2 (TXA2) levels were quantified by the Elisa method. In addition, the platelets viability was determined by MTT assays, the ROS levels by flow cytometry and the phosphorylation of cSrc by the western blotting technique. The inhibition of platelet aggregation by Tbv and Tsv was dose- and incubation time-dependent. ADP-induced aggregation was abolished by the incubation of Tsv (100 µg/ml) for 30 min with platelets (93 ± 4 % of inhibition). On the other hand, Tbv inhibited the aggregation by 63 ± 4 % at the concentration of 300 µg/ml incubated with platelets for the same time. Thrombin-induced aggregation was inhibited by 63 ± 4 and 67 ± 2 % after 30 min of platelets incubation with Tbv (300 µg/ml) and Tsv (100 µg/ml), respectively. The inhibitory effect of the venoms was not accompanied by the reduction on platelet viability. The total cytosolic Ca+2 concentrations in ADP- or thrombin-activated platelets, as well as the internal mobilization of this ion, were not modified by Tbv or Tsv, however, the Ca+2 influx was significantly reduced. Furthermore, the inhibition of aggregation by Tsv (100 µg/ml) was accompanied by the TXA2 synthesis reduction in ADP-activated platelets (reduction of 68 ± 2%). The cAMP and cGMP levels, as well as the c-Src phosphorylation, were not modified by the incubation of Tbv or Tsv for 15 min with platelets. Therefore, our results show that the inhibitory effect of Tb and Ts venoms on platelet aggregation is independent on ROS, cAMP and cGMP production or c-Src phosphorylation. Probably, the inhibitory effect of Tsv is, partially, due the reduction of TXA2 synthesis in platelets. Reduction of Ca+2 influx in ADP- or thrombin activated platelets is a common pathway on Tbv and Tsv effect, indicating an important role for this event in inhibiting aggregation by both venomsMestradoFarmacologiaMestra em FarmacologiaCNPQ133217  [s.n.]Marcondes, Sisi, 1966-Mónica, Fabíola ZakiaClaudino, Mário AngeloUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em FarmacologiaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASMorau, Mariana Vieira, 1990-20192019-02-21T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (77 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1636303MORAU, Mariana Vieira. Efeito dos venenos de Tityus bahiensis e Tityus serrulatus na reatividade plaquetária de ratos. 2019. 1 recurso online (77 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1636303. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1089044Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2019-06-17T14:27:05Zoai::1089044Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2019-06-17T14:27:05Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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