Coronavírus e metapneumovírus aviários em aves domésticas e silvestres do Brasil : caracterização molecular e filogenética

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Felippe, Paulo Anselmo Nunes
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1614359
Resumo: Orientador: Clarice Weis Arns
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spelling Coronavírus e metapneumovírus aviários em aves domésticas e silvestres do Brasil : caracterização molecular e filogenéticaAvian coronavirus and metapneumovirus from Brazilian domestic and wild birds : molecular characterization and phylogeneticCoronavírusMetapneumovírusAve selvagemPomboCoronavírusMetapneumovírusWild birdPigeonsOrientador: Clarice Weis ArnsTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O Brasil figura entre os maiores produtores e exportadores do mundo de carne de frango e ovos, o que confere a avicultura a capacidade de interferir na construção do PIB nacional. Estes índices envolvem a necessidade de uma alta produtividade e consequentemente um manejo zoosanitário suficiente para atender a economicidade do setor. Este estudo focou dois gêneros virais de importância na avicultura, o Coronavirus e o Metapneumovirus, objetivando verificar a presença de vírus em aves silvestres e sinantrópicas da avifauna brasileira, visando compreender melhor a eco-epizootiologia das respectivas morbidades de que são agentes etiológicos. Para tanto se coletou 134 amostras através de swabs traqueais e cloacais de 53 aves silvestres brasileiras de 20 espécies diferentes e de 14 pombas (Columba livia), que não possuíam sinais de doença. Além destas aves, foi também objeto de estudo amostras de galinhas e frangos comerciais oriundos de vários estados da federação nos anos de 2003 a 2009, com sintomas respiratórios. O material genético dos vírus encontrados foi extraído e submetido à reação de nested RT-PCR, destinado a amplificar a região hipervariável do gene que codifica a proteína S1 dos coronavírus e o gene que codifica a proteína G dos metapneumovírus. Os amplificados foram então sequenciados e analisados construindo-se árvores filogenéticas e matrizes de similaridade através de recursos de bioinformática. Foi possível recuperar seis (06) amostras de coronavírus de Columba livia e vinte e três (23) de galinhas domésticas. No estudo filogenético se observou dois grandes clusteres; um agrupando-se com o genótipo Massachusetts e outro com D207; das amostras de pomba 5 agruparam-se com Massachusetts; 1 amostra de galinha e uma de pomba agruparam com o genótipo Connecticut e 1 de galinha com o Arkansas. As amostras oriundas de pomba e as de galinha compartilharam uma similaridade que chegou a 100%, para algumas delas. Quanto aos metapneumovírus recuperou-se vírus de 7 aves silvestres, 7 de pombas e 15 de galinhas domésticas, sendo que estas amostras agruparam-se em dois grandes clusteres, um com o subtipo A (5 de aves silvestres, 2 de pombas e 1 de galinha) e outro com o subtipo B (2 de aves silvestres, 5 de pombas e 14 de galinha). A identidade genética entre os amplificados de galinha e de aves não domésticas chegou a 100%. Tanto para os coronavirus como para os metapneumovirus o isolamento de vírus com um de seus genes mais variáveis apresentando até 100% de identidade com os das galinhas domésticas, pode representar uma possível recuperação dos vírus atenuados utilizados nas vacinações de rotina, ou mesmo a passagem dos vírus patogênicos para estes animais, fazendo com que estes mantenham o agente no ambiente. Aves de diferentes espécies podem ainda funcionar enquanto um ambiente seletivo para estes vírus, provocando a fixação de novos genótipos virais, o que seria uma provável explicação para o fato destes agravos continuarem a ocorrer em granjas de todo o mundo em detrimento da existência de vacinas, além da possibilidade de surgimento de vírus recombinantes capazes de infectar humanos, como é o caso da SARSAbstract: Avian Coronavirus and Metapneumovirus in Brazilian Domestic and Wild Birds: Molecular Characterization and Phylogenetic. Brazil is among the largest producers and exporters of poultry meat and eggs in the world, which gives the poultry industry the capacity to interfere in the construction of national GDB. These indexes involve the need of a high productivity and consequently a sufficient zoosanitary management for the economy of the sector. This study focused on two important viral genera for this, Coronavirus and the Metapneumovirus, to verify the presence of virions in wild birds and synanthropic ones of Brazil, seeking a better understanding of those diseases and your ecoepizootiology. For that, were collected one hundred thirty-four samples (tracheal and cloacal swabs) from fifty three Brazilian wild birds of twenty different species and fourteen from pigeons (Columba livia), without symptoms, and samples of chickens from several states of the federation in the years from 2003 to 2009, with swollen head syndrome. The virus genetic material found was subjected to the reaction of nested RT PCR, to amplify the hypervariable region of the gene encoding the coronavirus S1 subunit of the S protein and the gene encoding the G protein of metapneumovirus. The amplified were then sequenced and analyzed by constructing phylogenetic trees and similarity matrices using bioinformatics resources. Were isolated six (6) coronavirus from Columba livia and twenty three (23) from domestic fowl. In the phylogenetic analysis, two major clusters were observed one grouped with Massachusetts genotype and the other with D207; samples of five pigeons grouped with Massachusetts as well, one chicken sample and one from pigeon were grouped with genotype Connecticut and other from chicken with Arkansas genotype. The samples from pigeons and chickens shared a similarity which reached 100%. As for metapneumovirus, virus was recovered from seven wild birds, seven pigeons and fifteen from chickens. These samples were grouped into two major clusters; with subtype A (five from wild birds, two from pigeons and one from chicken) and with subtype B (two wild birds, 5 pigeons and 14 chickens). The genetic similarity between chicken amplicons to non domestic birds reached 100%. For both coronavirus and metapneumovirus, virus isolation from non domestic birds and their great similarity (reached 100%) with those from chickens, may represent a possible recovery of the attenuated virus used in routine vaccinations, or even the passage of pathogenic viruses for these animals, causing them to keep the agent in the environment. Birds of different species can also function as a selective environment for these viruses, leading to the establishment of new viral genotypes, which would be a likely explanation for the fact that these injuries continue to occur on farms around the world, even with the use of vaccines, besides the possibility of emergence of recombinant viruses capable of infecting humans, as is the case with SARSDoutoradoMicrobiologiaMestre em Genética e Biologia Molecular[s.n.]Arns, Clarice Weis, 1956-Verinaud, Liana Maria CardosoMontassier, Helio JoseBrandão, Paulo EduardoBrocchi, MarceloUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASFelippe, Paulo Anselmo Nunes20112011-10-02T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf83 f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1614359FELIPPE, Paulo Anselmo Nunes. Coronavírus e metapneumovírus aviários em aves domésticas e silvestres do Brasil: caracterização molecular e filogenética. 2011. 83 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1614359. 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