Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
Data de Publicação: 1999
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082
Resumo: Orientador: Hiroshi Aoyama
id UNICAMP-30_4551c6d4343b2539b7cc6fb9559712dd
oai_identifier_str oai::171237
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de sojaFosfatasesSojaSementesEnzimasOrientador: Hiroshi AoyamaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: As quatro isofonnas de fosfatases ácidas purificadas de sementes de soj:quiescentes foram caracterizadas do ponto de vista fisico-químico e cinético. A isofonnas AP1, AP2, AP3A e AP3B apresentaram pontos isoelétricos de 4,9, 5,7 9,8 e 7,4, e quantidade de carboidratos totais de 30, 25, 18 e 10%, respectivamente Somente as isoformas AP 1 e AP3A apresentaram feITo em suas estruturas. As 4 isoformas apresentaram alta atividade catalítica à 80°C quando o pNPP foi utilizado como substrato, no entanto, quando TyrP foi utilizada, esta temperatura foi de 60 °C e para o PPi a temperatura máxima foi em tomo de 60°C para as isoformas AP 1 AP2 e AP3B e de 50°C para a isoformas AP3A. Estudos de estabilidade térmica foram realizados pré incubando-se as isoformas na ausência do substrato. Todas as isoformas perderam 20% da atividade quando pré incubadas a 60°C por 60 min. A 70°C as isoformas AP3A e AP3B mantiveram 30% de atividade residual. Todas a isoformas foram inativadas quando pré incubadas a 80°C. Estudos de estabilidade térmica na presença de alguns possíveis protetores, mostraram que os produtos da reação com o pNPP (pNP e fosfato) eram responsáveis pela estabilização de toda isoformas, favorecendo a alta atividade catalítica a 80°C. As 4 isoformas não foram significativamente afetadas por compostos que interagem com grupos -SH (pCMB, H2O2, CU²+), indicando a ausência de tais grupos no sítio ativo. Piridoxal fosfato também não apresentou efeito inibitório, (que mostra que estas enzimas não contêm resíduos de lisina essenciais para catálise. Todas as isoformas foram inibidas competitivamente pelo fosfato, vanadatc pervanadato, fluoreto e molibdato. A determinação das constantes de inibição (Ki revelou que o molibdato é o inibidor mais potente para todas as isoformas. A ConA apresentou efeito ativador somente para a isoformas API, o qual era dependente d4 substrato utilizado. As isoformas AP 1 e AP2 mostraram uma maior especificidade por substrato: que AP3A e AP3B. Foram realizados estudos cinéticos detalhados utilizando-S4 PEP, PPi, TyrP, Glic6P e Frut6P como substratos. Os resultados cinético: mostraram que estas isoformas poderiam participar em diferentes rotas metabólicasAbstract: The four isoforms of acid phosphatase (AP1, AP2, AP3A and AP3B) purified from mature soybean seeds, had their physico-chemical and kinetil properties detennined. The APl, AP2, AP3A and AP3B isofonns presentel isoeIectric points of 4.9, 5.7, 9.8 and 7.4 and total carbohydrate of 30, 25, 18 anl 10%, respectiveIy. Among the four isoforms only APl and AP3A presented iron u their structures. The four isoforms of soybean seeds acid phosphatases presentel high activities, even at temperatures above 80°C when pNPP was utilized a: substrate. On the other hand, Iowest optimum temperature values were obtainec using other substrates. With tyrosine phosphate, the maximum activity was observec at 60°C, and when PPi was used as substrate, the optimum temperature values wen 60°C for APl, AP2 and AP3B, and 50°C for AP3A. In order to investigate the thermal stability of the four acid phosphatases, the enzymes were preincubated it the absence of substrate. The four isoforms Iost only 20% activity at 60°C, afier 60 min; the isoforms AP3A and AP3B retained 30% of activity at 70°C, after 60 min; alI the isoforms were inactivated at 80°C, after 5 min. In order to verify whether the enzymatic forms could be protected against thermal inactivation, we tested some compounds with different characteristics. The best protective effect was observec when the enzymes were incubated in the presence of both reaction products, p-nitrophenoI and inorganic phosphate. The soybean seeds acid phosphatases were not significantly affected by compounds that interacted with -SH residues (pCMB, H2O2, CU²+), indicating th absence of such residues in the active sites. Pyridoxal phosphate had no effecl suggesting that lysine residues were not important to the enzyme catalysis. The four acid phosphatase isoforms API, AP2, AP3A and AP3B wer competitively inhibited by phosphate, vanadate, molybdate and fluoride; inhibitio: constant studies showed that molybdate was the most potent inhibitor. The AP soform was activated by lectin (ConA), which effect was dependent on the substrat utilized. The AP 1 and AP2 isoforms showed higher substrate specificity whe: compared with AP3A and AP3B. Detailed kinetic properties were studied using PEP, PPi, TyrP, Gluc6P an, Frut6P as substrate. These studies suggest that these isoforms could participated I different metabolic routesDoutoradoDoutor em Ciências[s.n.]Aoyama, Hiroshi, 1943-Bonafé, Carlos Francisco SampaioNovello, Jose CamilloSodek, LadaslavUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Ciências BiológicasUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASFerreira, Carmen Veríssima, 1969-19991999-05-03T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf113f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082FERREIRA, Carmen Veríssima. Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja. 1999. 113f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/171237porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T02:53:26Zoai::171237Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T02:53:26Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
title Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
spellingShingle Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
Fosfatases
Soja
Sementes
Enzimas
title_short Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
title_full Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
title_fullStr Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
title_full_unstemmed Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
title_sort Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja
author Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
author_facet Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Aoyama, Hiroshi, 1943-
Bonafé, Carlos Francisco Sampaio
Novello, Jose Camillo
Sodek, Ladaslav
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
dc.subject.por.fl_str_mv Fosfatases
Soja
Sementes
Enzimas
topic Fosfatases
Soja
Sementes
Enzimas
description Orientador: Hiroshi Aoyama
publishDate 1999
dc.date.none.fl_str_mv 1999
1999-05-03T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082
FERREIRA, Carmen Veríssima. Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja. 1999. 113f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082. Acesso em: 2 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082
identifier_str_mv FERREIRA, Carmen Veríssima. Caracterização Cinetica e Fisico-quimica de fosfatase acidas purificadas de sementes de soja. 1999. 113f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587082. Acesso em: 2 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/171237
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
113f. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809188820355121152

Registros relacionados