Analise dos padrões de internalização de cepas de Streptococcus mutans por macrofagos murinos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Negrini, Thais de Cassia
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1606209
Resumo: Orientadores: Renata de Oliveira Mattos-Graner, Edgard Graner
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spelling Analise dos padrões de internalização de cepas de Streptococcus mutans por macrofagos murinosAnalysis of patterns of uptake of Streptococcus mutans strains by murine macrophagesFagocitoseCárie dentáriaMicro-organismosPhagocytosisDental cariesMicroorganismsOrientadores: Renata de Oliveira Mattos-Graner, Edgard GranerDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Streptococcus mutans é o principal patógeno da cárie dentária. Antígenos (Ags) secretados ou associados à superfície celular de S. mutans participam deste processo e incluem a proteína ligante de glucano B (GbpB), a qual pode influenciar na susceptibilidade à infecção por S. mutans. Estudos recentes indicam que a expressão de antígenos de superfície reconhecida por fagócitos é controlada por sistemas de dois componentes (SDC) em espécies relacionadas a S. mutans. O objetivo deste projeto foi investigar o efeito de variações na produção de GbpB e a influência de dois SDC, Cov (de control of virulence) e Vic (de virulence control), no padrão de internalização de S.mutans por macrófagos de camundongos. Foram avaliadas 10 cepas clínicas distintas previamente caracterizadas quanto ao padrão de síntese de GbpB e quatro mutantes knock-out de dois SDC: dois mutantes covR- e dois mutantes vicH-. Para isto, macrófagos murinos da linhagem Balb/c foram cultivados em meio RPMI e expostos a diferentes cepas de S. mutans. Os níveis de internalização bacteriana por macrófagos foram determinados através da contagem de macrófagos com bactérias internalizadas, com auxílio de microscópio óptico. Os mecanismos de internalização foram caracterizados em ensaios semelhantes com macrófagos previamente tratados com inibidores específicos dos processos de fagocitose, macropinocitose e endocitose mediada por clatrina e em análises de microscopia eletrônica de transmissão. Não houve diferença estatisticamente significante nos níveis de internalização das cepas que variavam quanto à produção de GbpB. Os mutantes vicH- foram significativamente menos internalizados quando comparados às cepas selvagens e aos mutantes covR. As análises de MET e ensaios com inibidores de processos específicos de internalização indicam que, na ausência de opsoninas, S. mutans pode ser internalizado por diferentes mecanismos incluindo-se fagocitose, macropinocitose e endocitose mediada por clatrina. Esses dados poderão auxiliar na compreensão dos mecanismos de captação e processamento de S. mutans por células apresentadoras de antígenos e dos fatores que influenciam no padrão de resposta imune adaptativa a estes microrganismosAbstract: Streptococcus mutans are the main pathogens of dental caries. Antigens (Ags) secreted or associated with the bacterial cell surface may influence in the susceptibility to infection by S. mutans. These include the virulence protein Glucan-binding protein B (GbpB). Recent studies indicate that the expression of surface antigens recognized by phagocytes is controlled by systems of two components (TCS, Two Component System) in several streptococci species. The objective of this project was to investigate the effect of variations in the production of GbpB and the influence of the two-component systems (TCS), Cov and Vic, in the pattern of internalization of S. mutans by macrophages from mice under the absence of opsonins. Thus, levels of bacterial internalization by macrophages were evaluated in 10 different clinical strains of S. mutans previously characterized regarding the patterns of GbpB production, and in four knockout mutants of the TCS, two covR- mutants and two vicH- mutants. To this purpose, murine macrophages of the lineage Balb/c were cultured in RPMI medium and exposed to different strains of S. mutans. The levels of macrophages with internalized bacteria were determined with the help of an optical microscope. Patterns of bacteria internalization were analyzed in similar assays using macrophages previously treated with inhibitors of specific mechanisms of internalization (phagocytosis, macropinocytosis and endocytosis mediated by clathrin) and by electron transmission microscopy (ETM) analyses. There was no statistically significant difference in the efficiency of internalization between the strains that differed regarding production of GbpB. The mutants vicH- was significantly less internalized when compared with the respective wild type strains and mutants covR-. Analyses with specific inhibitors and ETM indicated that S. mutans can be internalized by phagocytosis, macropinocytosis and endocytosis mediated by clathrin. These data may help to understand the mechanisms by which S. mutans is internalized and processed by antigen-presenting cells and the factors affecting patterns of adaptative immune response to these bacteriaMestradoMicrobiologia e ImunologiaMestre em Biologia Buco-Dental[s.n.]Mattos-Graner, Renata de Oliveira, 1971-Graner, Edgard, 1968-Spolidorio, Denise Madalena PalomariHöfling, José FranciscoUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)Programa de Pós-Graduação em Biologia Buco-DentalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASNegrini, Thais de Cassia20082008-02-22T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf64f. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1606209NEGRINI, Thais de Cassia. Analise dos padrões de internalização de cepas de Streptococcus mutans por macrofagos murinos. 2008. 64f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1606209. 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