Efeito do 5-AzadC em linhagem de carcinoma de células escamosas oral exposta à fibroblastos associados ao câncer

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Mazzaro, Amanda Ramos, 1992-
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/14986
Resumo: Orientadores: Débora Campanella Bastos, Ana Paula de Souza
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spelling Efeito do 5-AzadC em linhagem de carcinoma de células escamosas oral exposta à fibroblastos associados ao câncerEffect of 5-AzadC on oral squamous cell carcinoma exposed to cancer-associated fibroblastsCarcinoma de células escamosas oralFibroblastos associados a câncerAzacitidinaOral squamous cell carcinomaCancer-associated fibroblastsAzacitidineOrientadores: Débora Campanella Bastos, Ana Paula de SouzaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) é uma neoplasia agressiva, com alto índice de metástase e sobrevida baixa para os pacientes. Além das alterações genéticas, a reprogramação epigenética é um evento significativo para o desenvolvimento desta neoplasia. Um exemplo expressivo de modulação epigenética acontece no microambiente tumoral (TME), uma rede complexa de componentes estromais que supre as células neoplásicas. Os fibroblastos associados ao câncer (CAFs) colaboram ativamente com as células de CCEO, viabilizando a carcinogênese, progressão, invasão e resistência quimioterápica, sugerindo que esta relação possa ser um importante alvo terapêutico. Neste cenário, drogas epigenéticas, como o 5-AzadC, despertam o interesse no tratamento de CCEO, especialmente para casos agressivos ou não responsivos às terapias convencionais. Entretanto, os princípios que norteiam a interação entre células de CCEO e CAFs, na presença de um agente desmetilante, ainda são desconhecidos. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar os efeitos do 5-AzadC em linhagem celular derivada de CCEO exposta à fibroblastos associados ao câncer. Para tanto, as células SCC9, em presença de células CAF11 ou de meio condicionado (MCCAF), foram tratadas com 0,3 e 1,0 µM de 5-AzadC e investigadas quanto a sua morfologia e viabilidade celular, além do co-cultivo direto de SCC9 e CAFs. Análises por microscopia óptica de contraste de fase revelaram diferenças morfológicas expressivas em células SCC9 tratadas com 5-AzadC em relação às SCC9 expostas ao veículo da droga. Após 48h de tratamento, na ausência de estímulos de CAFs, o 5-AzadC reduziu o número de células SCC9 e promoveu um aumento relevante do seu conteúdo citoplasmático, fato evidenciado em concentrações mais elevadas. Por outro lado, CAF11 e seu controle, NOF5 (fibroblastos orais normais), apresentaram poucas alterações morfológicas quando incubadas com 5-AzadC, limitadas a um sutil aumento citoplasmático. Na presença de MCCAF, o tratamento com 5-AzadC promoveu alterações morfológicas ainda mais significativas nas células SCC9, em comparação às SCC9 incubadas com o MCCtrl e MCNOF, vistas sobretudo no aumento do conteúdo citoplasmático das SCC9, sem redução do número de células. Estes dados foram confirmados pelos ensaios de MTT, no qual as SCC9 tiveram viabilidade significativamente aumentada quando tratadas com 0,3 µM de 5-AzadC na presença do MCCAF, em comparação ao MCNOF na mesma concentração da droga. Porém, este efeito não pôde ser observado quando a concentração de 5-AzadC foi elevada para 1,0 µM, onde os efeitos de MCCAF foram similares ao MCNOF. Estes achados foram potencializados nos ensaios de co-cultivo em transwells, que evidenciaram o aumento da viabilidade das SCC9 co-cultivadas com CAF11, independentemente da presença ou concentração de 5-AzadC. Em resumo, o 5-AzadC não foi capaz de sobrepor os efeitos da presença de CAFs ou dos fatores solúveis existentes em seu meio condicionado, sejam na viabilidade ou na morfologia das SCC9. Desta forma, os dados apresentados estabelecem padronizações sólidas para futuras investigações entre células de CCEO e CAF tratadas com um agente desmetilante e, principalmente, evidenciam a importância da inserção de componentes do microambiente tumoral, como os CAFS, na realização dos estudos in vitro com terapia epigenética em linhagens neoplásicasAbstract: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is an aggressive disease with high rates of metastasis and poor patient survival. In addition to genetic alterations, epigenetic reprogramming is a significant event in the development of this cancer. The most expressive example of epigenetic modulation occurs in the tumor microenvironment (TME), a complex network of stromal components that supplies neoplastic cells. Cancer-associated fibroblasts (CAFs) directly interact with OSCC cells, enabling carcinogenesis, progression, invasion, and chemotherapy resistance. Therefore, this interaction could be an important therapeutic target. This brings about interest in epigenetic drugs, such as 5-AzadC, in the treatment of OSCC, especially in cases that are particularly aggressive or non-responsive to conventional therapies. However, the principles of the interaction between OSCC neoplastic epithelial cells and CAFs in the presence of a demethylating agent are still unknown. The objective of this study is to evaluate the effects of 5-AzadC in a cell line derived from OSCC exposed to cancer-associated fibroblasts. SCC9 cells were treated with 0.3 and 1.0 µM 5-AzadC in the presence of CAF11 cells or conditioned medium (MCCAF), and their morphology, cell viability and co-culture were investigated. Phase contrast optical microscopic analysis showed significant morphological differences in SCC9 cells treated with 5-AzadC. After 48h of treatment, in the absence of CAFs stimuli, 5-AzadC reduced the number of SCC9 cells and promoted a significant increase cytoplasmically, both evidenced in higher concentrations. On the other hand, CAF11 and their control NOF5 (normal oral fibroblast) showed few morphological changes when incubated with 5-AzadC, such as a small cytoplasmic increase. In the presence of CAF-conditioned medium, treatment with 5-AzadC promoted even more significant morphological changes in SCC9 cells, compared to SCC9 cells incubated with MCNOF and MCCtrl, such as an increase in the cytoplasmic content of SCC9, without a reduction in the number of cells. These data were confirmed by MTT assays, in which SCC9 had significantly higher viability when treated with 0.3 µM 5-AzadC in the presence of MCCAF than MCNOF at the same concentration of 5-AzadC. These results were amplified in transwells co-culture assays, which showed increased viability of SCC9 co-cultured with CAF11, regardless of the presence or concentration of 5-AzadC. In summary, 5-AzadC was not able to overcome the effects of the CAF’s presence or soluble factors in its conditioned medium, either on the viability or morphology of SCC9. Therefore, the data presented establish solid standards for future investigations between CCEO and CAF cells treated with a demethylating agent and, mainly, show the importance of the insertion of components of the tumor microenvironment, such as CAFs, in the performance of in vitro studies with therapy epigenetics in neoplastic lineagesMestradoHistologia e EmbriologiaMestra em Biologia Buco-DentalCAPES88882.434536/2019-01[s.n.]Bastos, Débora Campanella, 1981-de Souza, Ana Paula, 1975-Graner, EdgardBúfalo, Natássia ElenaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)Programa de Pós-Graduação em Biologia Buco-DentalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASMazzaro, Amanda Ramos, 1992-20222022-08-16T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (114p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/14986MAZZARO, Amanda Ramos. Efeito do 5-AzadC em linhagem de carcinoma de células escamosas oral exposta à fibroblastos associados ao câncer. 2022. 1 recurso online (114p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/14986. 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