Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Oliveira, Simone Cristina Buzzo, 1982-
Data de Publicação: 2007
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414
Resumo: Orientador: Marcos Hikari Toyama
id UNICAMP-30_563aeb33d26f7cecd8f291de3dd445c2
oai_identifier_str oai::396004
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrumModulation in pharmacological action of botropics and crotalics PLA2 in presence of an lectin isolated from marine alga Bryothammion triquetrumFosfolipases ALectinasAlgaAgregação plaquetáriaEdemaPhospholipasesAlga LectinPlatelet agregationOedemaOrientador: Marcos Hikari ToyamaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Lectinas são proteínas que se ligam de forma específica e reversível a carboidratos. Estão distribuídas pelos mais diversos organismos e apresentam atividades de interesse em pesquisas biológicas e médicas. Neste trabalho, duas isoformas de lectina da alga marinha vermelha Bryothamnion triquetrum foram purificadas por cromatografia de troca iônica seguida por uma de fase reversa. As frações foram nomeadas de BTLD1 e BTLD2 e ambas apresentaram massa molecular aparente em SDSPAGE de aproximadamente 9,0 kDa. A análise dos aminoácidos de ambas as lectinas revelaram moléculas de caráter básico e as regiões Nterminal das lectinas foram seqüenciadas e comparadas entre si e com lectinas de outras algas, apresentando grande similaridade com hypninA1, hypninA2 e BTL. Além disso, o dicroísmo circular revelou que a estrutura secundária das proteínas é predominantemente de arranjo aleatório. A lectina BTLD2, a isoforma mais abundante do extrato da alga, apresentou ação antibacteriana contra a bactéria grampositiva Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm), mas não foi eficiente contra a bactéria gramnegativa Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (Xap). Também foram utilizados dois modelos de fosfolipases A2, uma isolada do veneno total de Crotalus durissus cascavella que é cataliticamente ativa do tipo Asp 49 (D49), e uma outra PLA2 cataliticamente não ativa do tipo Lys49 (K49), isolada do veneno de Bothrops jararacussu, para ensaios biológicos. A atividade farmacológica e biológica de ambas as PLA2s foi significativamente afetada pela coincubação das mesmas com BTLD2. A formação de heterodímeros de BTLD2 com a PLA2 de Crotalus durissus cascavella ou com a PLA2 de Bothrops jararacussu sugere a formação de um complexo estável em solução com uma massa molecular de aproximadamente 23,0 kDa. A BTLD2 também foi capaz de aumentar significativamente a atividade enzimática da PLA2 de C. d. ascavella em comparação com a PLA2 cataliticamente ativa isolada. As PLA2s de C. d. cascavella e B. jararacussu mostraram forte atividade antibacteriana contra bactérias Cmm e tiveram pouco efeito contra a bactéria Xap. Entretanto, o complexo BTLD2: PLA2 D49 ou K49 mostram um aumento da atividade antibacteriana, principalmente contra a bactéria Xap. As PLA2s induziram atividade edematogênica em pata de ratos e também foram capazes de induzir uma forte agregação plaquetária usando o sistema de plaquetas lavadas. Em ambos os sistemas, o complexo BTLD2: PLA2 mostrou uma atividade menor do que os respectivos controles. Concluindo, os resultados apresentados mostram que esta nova lectina isolada de alga vermelha possui uma evidente capacidade de interação com moléculas de PLA2, tanto cataliticamente ativas quanto inativas, com a formação de heterodímeros. Portanto, esta interação é capaz de modificar significativamente a estrutura terciária da PLA2, uma vez que o complexo mostrou atividade enzimática aumentada além de possivelmente alterar a estrutura de outras regiões moleculares da enzima. É importante verificar que a atividade farmacológica das PLA2s não tem uma correlação direta com a atividade catalítica das mesmas, envolvendo outras regiões que permitem a sua interação com receptores cuja região está distante do sítio catalítico da PLA2Abstract: Lectins are proteins that bind specifically and reversibly to carbohydrates. They are widely distributed among living organisms and show many activities of biological and medical interest. In this work, two isoforms of lectins isolated from the red marine alga Bryothamnion triquetrum were purified by ion exchange followed by reverse phase chromatographies. The fractions named BTLD1 and BTLD2 showed apparent molecular mass of approximately 9.0 kDa in SDSPAGE. Both lectins probably have a basic character, as indicated the amino acid analyses using the Compute pI/Mw tool at the ExPASy server. The Nterminal sequences were compared between both lectins and also to other lectins, showing similarity with hypninA1, hypninA2 and BTL. The circular dichroism indicated that the secondary structure of the proteins are predominantly random coiled. Additionaly, BTLD2 (the more abundant lectin isoform in the alga extract) showed antibacterial activity against the grampositive bacteria Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm) but was not effective against the gramnegative bacteria Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (Xap). A possible modulation of phospholipase activity by BTLD2 was also studied using two phospholipases A2, one isolated from Crotalus durissus cascavella venom that is Asp49 (D49) catalytically active, and other PLA2 Lys49 (K49) catalytically non active from Bothrops jararacussu venom. The pharmacological and biological activities of PLA2s were significantly change by incubation with BTLD2. The heterodimer formation of BTLD2 with Crotalus durissus cascavella or Bothrops jararacussu PLA2s appears to be a stable complex in solution with a molecular mass of approximately 23 kDa. BTLD2 significantly increased the enzymatic activity of the PLA2 from C.d. cascavella compared to the PLA2 alone. Both PLA2s (catalytically active and nonactive) showed strong antibacterial activity against Cmm with little effect against Xap. However, the BTLD2: PLA2 D49 or K49 complexes showed increase in antibacterial activity, particularly against Xap. Moreover, both PLA2s induced edematogenic activity in rat paw and strong platelet aggregation in washed platelets system. Interestingly, addition of BTLD2 with consequent formation of the BTLD2: PLA2 complex decreased both PLA2induced edema and platelet aggregation. Taken toghether, these results show that this new lectin isolated from a red alga and named BTLD2 has the capacity to interact with catalytic or noncatalytic PLA2, forming heterodimers. Therefore, this interaction possibly modify the PLA2 tertiary structure; as the complex BTLD2: PLA2 increase the enzymatic activity of PLA2 (i.e., the phospholipase activity) but at the same time decrease pharmacological and biological PLA2 activities not related to catalysis (i.e., platelet aggregation and edema). This suggests that the PLA2 structure is possibly modified in other sites of the enzyme rather than in the catalytic site. It can be concluded that the PLA2s has several binding sites for different molecules comprising the catalytic site responsible for the phospholipase activity and at least one more pharmacological site responsible for the effects observed after interaction with BTLD2. Therefore, the pharmacological activity of PLA2s has no direct correlation with the catalytic activity, involving other binding sites that allow receptor interaction whose position might be far from the catalytic site of PLA2MestradoBioquímicaMestre em Biologia Funcional e Molecular[s.n.]Toyama, Marcos HikariHaddad Junior, VidalSouza, Kleber Luiz de Araujo eUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biologia Funcional e MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASOliveira, Simone Cristina Buzzo, 1982-20072007-02-22T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf74p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414OLIVEIRA, Simone Cristina Buzzo. Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum. 2007. 74p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/396004porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T04:47:38Zoai::396004Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T04:47:38Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
Modulation in pharmacological action of botropics and crotalics PLA2 in presence of an lectin isolated from marine alga Bryothammion triquetrum
title Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
spellingShingle Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
Oliveira, Simone Cristina Buzzo, 1982-
Fosfolipases A
Lectinas
Alga
Agregação plaquetária
Edema
Phospholipases
Alga Lectin
Platelet agregation
Oedema
title_short Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
title_full Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
title_fullStr Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
title_full_unstemmed Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
title_sort Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum
author Oliveira, Simone Cristina Buzzo, 1982-
author_facet Oliveira, Simone Cristina Buzzo, 1982-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Toyama, Marcos Hikari
Haddad Junior, Vidal
Souza, Kleber Luiz de Araujo e
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
Programa de Pós-Graduação em Biologia Funcional e Molecular
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Oliveira, Simone Cristina Buzzo, 1982-
dc.subject.por.fl_str_mv Fosfolipases A
Lectinas
Alga
Agregação plaquetária
Edema
Phospholipases
Alga Lectin
Platelet agregation
Oedema
topic Fosfolipases A
Lectinas
Alga
Agregação plaquetária
Edema
Phospholipases
Alga Lectin
Platelet agregation
Oedema
description Orientador: Marcos Hikari Toyama
publishDate 2007
dc.date.none.fl_str_mv 2007
2007-02-22T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414
OLIVEIRA, Simone Cristina Buzzo. Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum. 2007. 74p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414. Acesso em: 2 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414
identifier_str_mv OLIVEIRA, Simone Cristina Buzzo. Modulação da ação farmacologica de PLA2 botropicas e crotalicas em presença de uma lectina isolada da alga marinha Bryothamnion triquetrum. 2007. 74p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1604414. Acesso em: 2 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/396004
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
74p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809188960716455936

Registros relacionados