Estudo comparativo entre os adsorventes agarose-CM-Asp-Co2+ e agarose-IDA-Co2+ na adsorção de IgG humana

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Tsai, Yuan Ming
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615803
Resumo: Orientador: Sônia Maria Alves Bueno
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spelling Estudo comparativo entre os adsorventes agarose-CM-Asp-Co2+ e agarose-IDA-Co2+ na adsorção de IgG humanaComparative study of adsorbents agarose-CM-Asp-Co2+ e agarose-IDA-Co2+ in the human IgG adsorptionImunoglobulina GQuelatosCromatografia de afinidadeCobaltoIgGChelatesAffinity chromatographyCobaltOrientador: Sônia Maria Alves BuenoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia QuímicaResumo: O presente trabalho teve como objetivo principal, o estudo comparativo dos agentes quelantes CM-Asp e IDA no processo da purificação de IgG humana por cromatografia de afinidade por íon metálico cobalto imobilizado em diferentes sistemas tamponantes na presença e ausência do sal NaCl. Observou-se, para todos os sistemas tamponantes estudados, a adição de sal foi desfavorável em termos de capacidade e seletividade de adsorção de IgG para ambos os agentes quelantes. De acordo com eletroforeses SDS-PAGE e análises nefelométricas, os melhores resultados foram observados em presença de Tris-HCl 25 mmol/L, pH 7,0 para o quelato CM-Asp-Co2+ e fosfato de sódio 25 mmol/L com imidazol 2 mmol/L, pH 7,0 para o quelato IDA-Co2+, obtendo-se fatores de purificação de 8,1 e 4,1 e pureza de 100% e 96%, respectivamente. Foram determinadas as curvas de ruptura por meio de experimentos cromatográficos realizados a diferentes diluições do soro humano, os resultados obtidos evidenciaram uma maior eficiência em termos da capacidade de adsorção nas diluições a 5 e 10 vezes (0,89 e 1,03 mg de proteína total/mL gel) comparado a soro diluído a 2,5 vezes (0,40 mg de proteína total/mL gel), tendo estes demonstrado comportamentos similares ao apresentado em etapa cromatográfica. Os dados de adsorção de IgG foram bem representados pelo modelo de Langmuir-Freundlich, a 25ºC, fornecendo valor de Qm igual a 94,44 mg IgG/mL gel e constante de dissociação de 8,18 x 10-5 mol/L, ordem de grandeza característica para ligantes pseudobioespecíficosAbstract: In this work, we targeted the comparative study between chelating ligands agarose-CM-Asp and agarose-IDA in the purification of human IgG by Immobilized Metal-ion Affinity Chromatography (IMAC) with immobilized cobalt ion in different buffering systems in the presence or absence of salt. For all buffering systems the addition of salt was unfavorable in terms of adsorption capacity of IgG for both chelating ligands. The best results were obtained in the absence of salt. According to SDS-PAGE electrophoresis and nephelometric analysis, the best conditions observed were Tris-HCl 25 mmol/L, pH 7,0 for the agarose-CM-Asp and sodium phosphate 25 mmol/L with imidazole 2 mmol/L for the agarose-IDA (purification factor of 8,1 and 4,1 and purity of 100% and 96%, respectively). Chromatographic experiments were carried out with different dilutions of human serum to determine the breakthrough curves. The results showed a higher efficiency in terms of adsorption capacity at dilutions of 5 and 10 times (0.89 and 1.03 mg of protein Total / mL gel) compared to serum diluted 2.5 times (0.40 mg total protein / mL gel), these results had similar behaviors as those showed in the chomatografic stage. The adsorption data of IgG at 25ºC were well represented by Langmuir-Freundlich model. Values of Qm equal 94,44 mg of IgG/mL gel and dissociation constant of 8,18 x 10-5 mol/L, characteristic magnitude of pseudospecific ligandsMestradoDesenvolvimento de Processos BiotecnológicosMestre em Engenharia Química[s.n.]Bueno, Sonia Maria Alves, 1961-Miranda, Everson AlvesFarinas, Cristiane SanchezUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Engenharia QuímicaPrograma de Pós-Graduação em Engenharia QuímicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASTsai, Yuan Ming2011info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf101 p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615803TSAI, Yuan Ming. Estudo comparativo entre os adsorventes agarose-CM-Asp-Co2+ e agarose-IDA-Co2+ na adsorção de IgG humana. 2011. 101 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615803. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/803552porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T06:20:17Zoai::803552Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T06:20:17Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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