Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Salles, Cléber Alencar, 1967-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089
Resumo: Orientador: Edson Antunes
id UNICAMP-30_6bd80b4b2c34008a3d2150aa088925ef
oai_identifier_str oai::1092714
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênioEffect of methylglyoxal in human plaquetary aggregation : the role of reactive oxygen speciesProdutos finais de glicosilação avançadaGuanilato ciclaseGMP cíclicoDihidroetídioGlycation end products, AdvancedSoluble guanylyl cyclaseCyclic GMPDihydroethidiumOrientador: Edson AntunesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Metilglioxal (MGO), um metabólito da via da glicólise, tem sido implicado nas complicações cardiovasculares do diabetes. Assim, nós investigamos os efeitos do MGO na geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) e na agregação plaquetária em plaquetas humanas lavadas. Plaquetas humanas (1,5 × 108 plaquetas/ml) foram pré-incubadas com MGO (0,08 - 0,64 mM, 15 min), após as quais foram ativadas com trombina (0,003 - 0,3 U/ml), colágeno (0,1 ¿ 10,0 µg/ml) e U46619 (0.25 - 2,0 µM), análogo do tromboxano. Ensaios de citometria de fluxo utilizando o diacetato de 2'-7'-diclorofluoresceína (DCFH-DA) e dihidroetídio (DHE) foram realizados para avaliar os níveis de EROs em plaquetas. Análises da agregação plaquetária, teste de ELISA (dosagem de GMPc e TXB2) e western blotting (análise das expressões das subunidades ?1 e ?1 da guanilil ciclase solúvel - GCs), foram realizados para identificar possíveis vias de sinalização. Metilglioxal (0,08 e 0,16 mM) elevou significativamente os níveis de EROs, medidos pelas técnicas de citometria através das sondas DCFH-DA ou DHE. Trombina e colágeno individualmente aumentaram significativamente os níveis de EROs, a pré-incubação com MGO não potencializou os níveis de EROs nas plaquetas ativadas, exceto, na ativação com trombina na concentração de 0,3 U/ml. O antioxidante apocinina (100 µM) preveniu a geração de EROs induzida pela MGO. Além disso, o MGO amplificou a agregação plaquetária induzida pela trombina e colágeno, que foi restaurada pela apocinina. Nós testamos ainda a possibilidade da MGO inativar a sinalização óxido nítrico (NO) ¿ guanilato ciclase solúvel (GCs) ¿ monofosfato cíclico de guanosina (GMPc), nas plaquetas. O nitroprussiato de sódio (10 µM) reduziu significativamente a agregação plaquetária induzida pela trombina, colágeno e U46619, aumentando os níveis de GMPc. No entanto, o MGO não modificou nem as respostas mediadas por SNP nem a expressão proteica das subunidades GCs ?1 e ?1. Em resumo, nossos dados mostram que o MGO aumenta os níveis de EROs intraplaqueta e amplifica a agregação plaquetária humana induzida pela trombina, colágeno e U46619, por mecanismos independentes da inativação da sinalização NO-GCs-GMPc. Fármacos capazes de capturar o MGO produzido no organismo, podem ser uma opção para melhorar as complicações da trombose relacionada ao diabetesAbstract: Methylglyoxal (MGO), a metabolite of the glycolysis pathway, has been implicated in the cardiovascular complications of diabetes. Thus, we investigated the effects of MGO on the generation of reactive oxygen species (ROS) and platelet aggregation in human washed platelets. Human platelets (1.5 × 108 platelets/ml) were preincubated with MGO (0.08-0.64 mM, 15 min), after which they were activated with thrombin (0.003-0.3 U/ml) or collagen (0.1-10.0 ?g/ml) and U46619 (0.25 - 2.0 ?M) analogue of thromboxane. Flow cytometry assays using 2'-7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) and dihydroethidium (DHE) techniques were carried out to evaluate platelet ROS levels. Platelet aggregation, ELISA (measurement of cGMP and TXB2) and western blotting (analysis of soluble guanylyl cyclase ?1 and ?1 subunits) were performed to identify possible signaling pathways. Methylglyoxal (0.08 and 0.16 mM) significantly elevated the ROS levels, as measured by either DCFH-DA or DHE techniques. Thrombin and collagen individually increased ROS levels significantly, pre-incubation with MGO did not potentiate ROS levels in activated platelets, except for activation with 0.3 U/ml thrombin. The antioxidant apocynin (100 ?M) prevented the MGO-induced ROS generation. In addition, MGO amplified the platelet aggregation induced by thrombin and collagen, which was restored by apocynin. We further tested the possibility of MGO inactivating the nitric oxide (NO) - soluble guanylate cyclase (sGC) - cyclic guanosine monophosphate (cGMP) signaling in platelets. Sodium nitroprusside (10 ?M) significantly reduced platelet aggregation induced by thrombin, collagen and U46619, increasing cGMP levels. However, MGO modified neither the SNP-mediated responses or the protein expression of the sGC ?1 and ?1 subunits. In summary, our data show that MGO increases intracellular ROS levels and amplifies human platelet aggregation induced by thrombin, collagen and U46619, by mechanisms independent of the inactivation of NO-sGC-cGMP signaling. MGO scavengers could be an option to ameliorate diabetes-related thrombosis complicationsMestradoFarmacologiaMestre em FarmacologiaFAPESP2017 / 15175-1[s.n.]Antunes, Edson, 1960-Marcondes, SisiSouza, Ivani Aparecida deUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em FarmacologiaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASSalles, Cléber Alencar, 1967-20192019-07-12T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (83 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089SALLES, Cléber Alencar. Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana: papel das espécies reativas de oxigênio. 2019. 1 recurso online (83 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1092714Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2021-07-14T12:53:02Zoai::1092714Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2021-07-14T12:53:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
Effect of methylglyoxal in human plaquetary aggregation : the role of reactive oxygen species
title Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
spellingShingle Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
Salles, Cléber Alencar, 1967-
Produtos finais de glicosilação avançada
Guanilato ciclase
GMP cíclico
Dihidroetídio
Glycation end products, Advanced
Soluble guanylyl cyclase
Cyclic GMP
Dihydroethidium
title_short Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
title_full Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
title_fullStr Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
title_full_unstemmed Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
title_sort Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana : papel das espécies reativas de oxigênio
author Salles, Cléber Alencar, 1967-
author_facet Salles, Cléber Alencar, 1967-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Antunes, Edson, 1960-
Marcondes, Sisi
Souza, Ivani Aparecida de
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
Programa de Pós-Graduação em Farmacologia
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Salles, Cléber Alencar, 1967-
dc.subject.por.fl_str_mv Produtos finais de glicosilação avançada
Guanilato ciclase
GMP cíclico
Dihidroetídio
Glycation end products, Advanced
Soluble guanylyl cyclase
Cyclic GMP
Dihydroethidium
topic Produtos finais de glicosilação avançada
Guanilato ciclase
GMP cíclico
Dihidroetídio
Glycation end products, Advanced
Soluble guanylyl cyclase
Cyclic GMP
Dihydroethidium
description Orientador: Edson Antunes
publishDate 2019
dc.date.none.fl_str_mv 2019
2019-07-12T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089
SALLES, Cléber Alencar. Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana: papel das espécies reativas de oxigênio. 2019. 1 recurso online (83 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089. Acesso em: 3 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089
identifier_str_mv SALLES, Cléber Alencar. Efeito do metilglioxal na agregação plaquetária humana: papel das espécies reativas de oxigênio. 2019. 1 recurso online (83 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1637089. Acesso em: 3 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1092714
Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDF
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
1 recurso online (83 p.) : il., digital, arquivo PDF.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809189149080551424

Registros relacionados