Propriedades cineticas da treonil-tRNA sintetase de figado bovino. Reações de intercambio ATP-PPi E de aminoacilação

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Barbosa, Neuza Maria, 1946-
Data de Publicação: 1981
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1576511
Resumo: Orientador : Hiroshi Aoyama
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spelling Propriedades cineticas da treonil-tRNA sintetase de figado bovino. Reações de intercambio ATP-PPi E de aminoacilaçãoBiologia - Aplicação - QuímicaOrientador : Hiroshi AoyamaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A treónil-Trna sintetase foi purificada de fígado bovino utilizando-se centrifugações diferenciais, saturação fracionada com sulfato de amônio e cromatografias em DEAE-celulose, hidroxiapatita e fosfocelulose. A purificação foi de cerca de 120 vezes, com renimento de 7%. A eletroforese em gel de poliacrilamida mostrou que a purificação não está totalmente homogênea. A enzima é mais estável a -20ºC em presença de 50% glicerol. Com esta enzima foram realizados estudos físicoquímicos com a finalidade de determinar alguns parâmetros cinéticos. Na reação de intercâmbio ATP-Ppi, onde a presença de tRNA não é necessária, e as especificidades pela treonina e pelo ATP são bastante altas, obteve-se KM(ATP)=1,1.10-4M; KM(treonina) = 1,2.10-4M; KM(pirofosfato) = 2,1.10-4M. Na reação de formação de treonil-tRNA foram obtidos KM(ATP) = 2,2.10-5M; KM(treonina)=4.10-6M; KM(tRNA) = 2,4.10-4M. Ambas as reações dependem de Mg2+ e são sensíveis a reagentes sulfidrílicosAbstract: Threonyl-tRNA synthetase was extracted from beef liver and purified by differential centrifugations, neutral salt precipitation and chromatographic procedures. The degree of purification obtained about 120 fold, with a yield of 7%. The analysis by polyacrylamide electrophoresis has shown a small heterogeneity at the last step of the enzyme purification. The kinetic parameters were studied and the KM values determined: KM(ATP) = 1,1x10-4M; KM(threonine) = 1,2x10-4M and KM(PPi) =2.1x10-4M for ATP-Ppi exchange reaction. For threonyl-tRNA formation reaction the KM values found were? 2.2 a 10-5M (ATP)/ 4x10-6M (threonine) and 2.4x10-4M (tRNA). Both reactions were Mg2+ dependent and presented sensibility to sulfhydryl reagentsMestradoMestre em Ciências Biológicas[s.n.]Aoyama, Hiroshi, 1943-Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação não informadoUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASBarbosa, Neuza Maria, 1946-1981info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf89f. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1576511BARBOSA, Neuza Maria. Propriedades cineticas da treonil-tRNA sintetase de figado bovino. Reações de intercambio ATP-PPi E de aminoacilação. 1981. 89f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1576511. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/44303porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2014-04-17T23:01:18Zoai::44303Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2014-04-17T23:01:18Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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