Efeitos da terapia com diodo emissor de luz (LEDT) sobre as células musculares distróficas de camundongos mdx : Effects of light emitting diode therapy (LEDT) on dystrophic muscle cells od mdx mice

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rocha, Guilherme Luiz da, 1989-
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/7801
Resumo: Orientador: Elaine Minatel
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spelling Efeitos da terapia com diodo emissor de luz (LEDT) sobre as células musculares distróficas de camundongos mdx : Effects of light emitting diode therapy (LEDT) on dystrophic muscle cells od mdx miceEffects of light emitting diode therapy (LEDT) on dystrophic muscle cells od mdx miceTerapia com luz de baixa intensidadeDiodos emissores de luzCultura primária de célulasCamundongos endogâmicos mdxLow-level light therapyLight-emitting diodesPrimary cell cultureMice, inbred mdxOrientador: Elaine MinatelTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O presente estudo teve como objetivo analisar os efeitos da fotobiomodulação (FBM) por meio da terapia com diodo emissor de luz (LEDT) sobre as culturas primárias de células musculares sadias e distróficas de camundongos C57BL/10 e mdx (modelo experimental da distrofia muscular de Duchenne (DMD). Inicialmente verificou-se o efeito citotóxico da LEDT nos comprimento de onda 420, 470, 660 e 850 nm com diferentes doses de energia (0,5, 1, 2,5, 5 e 10 J) com o objetivo de escolher as dosagens mais seguras para prosseguir com o estudo. Após esta etapa, as doses 0,5 e 5 J foram selecionadas e analisou-se as concentrações de Ca2+ intracelular e H2O2. Com base nos resultados obtidos, a dose 0,5 J foi mantida e avaliou-se o conteúdo de proteínas associadas com o Ca2+, estresse oxidativo e processo inflamatório, bem como com a diferenciação miogênica e proteínas que atuam na regulação deste processo. As culturas celulares foram tratadas no 5° dia de diferenciação e analisadas após 48 horas. Os ensaios de viabilidade celular mostraram que a LEDT não apresentou citotoxicidade sobre as células C57BL/10 e mdx. As células mdx não tratadas apresentaram aumento nas concentrações de Ca2+ quando comparada às C57BL/10, que foram reduzidas após LEDT, sendo acompanhada de redução do conteúdo de TRPC-1, sem alterações em TRPC-6 e calsequestrina. As células mdx não tratadas apresentaram ainda aumento nas concentrações de H2O2 em relação às C57BL/10, que foram reduzidas após LEDT, sendo acompanhada de redução dos níveis de 4-HNE, Catalase, SOD-2 e GR, sem alterações em GPx-1 e GSH. Além disso, as células mdx tratadas apresentaram redução do conteúdo de NF-kB e TNF-alfa. Em relação a diferenciação miogênica, observou-se que as células mdx tratadas apresentaram redução dos níveis de MyoD, seguido do aumento de miogenina e MHCslow, que foram acompanhadas de aumento de p-AKT, p-mTOR e p-FoxO1, sem alterações em MHCfast e miostatina, quando comparada às controle. Com base nos resultados obtidos, acredita-se que a LEDT possa ser utilizada como uma terapia alternativa no tratamento das distrofinopatias, por ter se mostrado importante na modulação do Ca2+, estresse oxidativo, processo inflamatório e diferenciação miogênica, além de ter atuado sobre os principais elementos das vias de sinalização de AKT, o que poderia justificar em parte, os resultados obtidos quanto a aceleração do processo de diferenciação miogênicaAbstract: The present study aimed to analyze the effects of photobiomodulation (FBM) through light emitting diode therapy (LEDT) on primary cultures of healthy and dystrophic muscle cells from C57BL/10 and mdx mice (experimental model of Duchenne Muscular Dystrophy (DMD). Initially, it was verified the cytotoxic effect of LEDT at wavelengths 420, 470, 660 and 850 nm with different energy doses (0.5, 1, 2.5, 5 and 10 J) in order to choose the highest doses safe to proceed with the study. After this step, 0.5 and 5 J doses were selected and analyzed as intracellular Ca2+ and H2O2 procedures. Based on the obtained results, the 0.5 J energy dose was maintained and then it was evaluated the content of proteins associated with Ca2+, oxidative stress, inflammatory process, as well as myogenic differentiation and proteins that act regulating it. Cell cultures were treated on the 5th day of differentiation and analyzed after 48 hours. Cell viability assays showed that LEDT did not show cytotoxicity on C57BL/10 and mdx cells. Untreated mdx cells showed an increase in Ca2+ concentrations when compared to C57BL/10, which were reduced after LEDT, being accompanied by a reduction in TRPC-1 content, with no changes in TRPC-6 and calsequestrin. Untreated mdx cells also showed an increase in H2O2 concentrations when compared to C57BL/10, which were reduced after LEDT, being accompanied by a reduction in the levels of 4-HNE, Catalase, SOD-2 and GR, without changes in GPx-1 and GSH. Furthermore, treated mdx cells showed a reduction in the content of NF-kB and TNF-alpha. Regarding myogenic differentiation, it was observed a reduction in MyoD levels in treated mdx cells, followed by an increase in Myogenin and MHCslow levels, which were accompanied by an increase in p-AKT, p-mTOR and p-FoxO1, with no changes in MHCfast and Myostatin, when compared to control. Based on these results, it is believed that LEDT can be used as an alternative therapy in the treatment of dystrophinopathies, as it has been shown to be important in the modulation of Ca2+, oxidative stress, inflammatory process and myogenic differentiation, in addition to acting on the main elements of the AKT signaling pathways, which could partially explain the obtained results regarding the acceleration of the myogenic differentiation processDoutoradoAnatomiaDoutor em Biologia Celular e EstruturalCAPES88882.329645/2019-01[s.n.]Minatel, Elaine, 1976-Maurício, Adriana FogagnoloPertille, AdrianaGandra, Paulo GuimarãesUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). 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