Aspectos da angiogênese na anemia falciforme : papel das plaquetas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Fabris, Fernanda Camila Zauli, 1987-
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/2589
Resumo: Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto
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spelling Aspectos da angiogênese na anemia falciforme : papel das plaquetasAspects of angiogenesis in sickle cell disease : role of plateletAnemia falciformeNeovascularizaçãoPlaquetas (Sangue)Sickle cell diseaseAngiogenesisPlatetetOrientador: Nicola Amanda Conran ZorzettoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A Doença Falciforme (DF) é causada por uma mutação genética que resulta na substituição de um único aminoácido da cadeia da ?-globina, levando à formação de uma hemoglobina anômala conhecida como hemoglobina S. Em situações de baixas concentrações de oxigê-nio, a hemoglobina se polimeriza, levando as hemácias a assumirem um formato alongado, em um evento conhecido como falcização. A angiogênese é o processo pelo qual ocorre a formação de novos vasos a partir de vasos pré-existentes. Estudos mostraram que pacientes com DF, no geral, apresentam níveis elevados de fatores angiogênicos plasmáticos e que as plaquetas de pacientes com anemia falciforme (AF) podem circular em estado ativado na circulação sanguínea. Como já é conhecido que as plaquetas funcionam como reservatórios de fatores envolvidos na inflamação e na angiogênese, o objetivo deste projeto foi avaliar o papel das plaquetas de pacientes com DF nos principais mecanismos angiogênicos das célu-las endoteliais in vitro, utilizando células endoteliais humanas de cordão umbilical (HU-VEC). As células HUVEC foram co-cultivadas com plaquetas separadas do sangue perifé-rico de pacientes portadores de AF (HbSS) e DF (HbSC), e de indivíduos sadios (HbAA) por 24 horas. A quantificação das células HUVEC em proliferação se deu através de um kit comercial (BrdU). Para avaliação da formação de estruturas tipo capilares pelas células en-doteliais (CE) utilizou-se matriz GFR-Matrigel. Os ensaios de invasão e migração foram realizados em câmara dupla de Matrigel e por meio da técnica de Scratch. A análise do se-cretoma e da expressão de receptores na superfície de plaquetas foi feita através do ensaio de multiplex e citometria de fluxo. Os resultados do estudo indicam que as plaquetas de pacientes com DF (HbSS e HbSC) e controle podem estimular a formação de estruturas capilares, a invasão e a migração das CE, in vitro. Nossos achados também demonstram que o co-cultivo de CE com plaquetas de pacientes com AF, no mesmo poço, resulta no aumen-to da capacidade de invasão das CE. Em relação a análise da secretoma das plaquetas, ob-servamos que, em 24 horas, as plaquetas de pacientes com AF secretam concentrações ele-vadas dos fatores pró-angiogênicos ANG 1, angiogenina, e PDGF AA, e do fator anti-angiogênico, endostatina. Também, mostramos que as plaquetas de pacientes com AF do nosso grupo de pesquisa apresentam um aumento na expressão do receptor de trombina, PAR-1. Nosso trabalho reforça a hipótese de que as plaquetas participam do processo an-giogênico da AF e abre perspectivas para novos estudos. Considerando que pacientes com DF possuem contagens elevadas de plaquetas, destacamos as plaquetas como um alvo tera-pêutico no tratamento da DFAbstract: Sickle cell disease (SCD) is caused by a genetic mutation that results in the substitution of a single amino acid in the ?-globin chain, leading to the formation of an anomalous hemoglo-bin known as hemoglobin (HbS). At low blood oxygen concentrations, HbS polymerizes and red blood cells undergo sickling. Angiogenesis is the process by which the formation of new vessels occurs from pre-existing vessels. Previous studies have shown that patients with SCD have increased levels of plasma angiogenic factors, which indicates a proangio-genic state in these individuals, and that platelets from patients with sickle cell anemia (SCA) circulate in an activated state in the bloodstream. As platelets are known to serve as reservoirs for factors involved in inflammation and angiogenesis, the aim of this project was to evaluate the role of platelets from SCD patients in the major angiogenic mechanisms of endothelial cells in vitro, using Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC). HU-VEC cells were co-cultured with platelets isolated from the peripheral blood of patients with SCA (HbSS) and SCD (HbSC), and from healthy individuals (HbAA) for 24 hours. The quantification of proliferating cells was carried out using a commercial kit (BrdU), and HUVEC were cultured in the presence and absence of platelets on GFR-Matrigel matrix to assess the formation of capillary-like structures by endothelial cells. Invasion and migration assays were performed in dual chamber plates using Matrigel, and the Scratch technique, respectively. The secretome and the expression of receptors on the surface of platelets were analyzed using multiplex assays and flow cytometry. Our data indicate that SCD and con-trol platelets can stimulate the formation of capillary structures, and the invasion and migra-tion of endothelial cells (EC), in vitro. Our findings also show that the co-cultivation of EC with SCA platelets, in the same well, results in increased EC invasiveness. SCA platelets were found to secrete, during a 24-hour period, increased levels of the pro-angiogenic fac-tors, Ang 1, angiogenin and PDGF-AA, and the anti-angiogenic factor endostatin, and pre-sented an increased expression of the PAR-1 thrombin receptor. Our work reinforces the hypothesis that platelets participate in the angiogenic process of SCA and provides perspec-tives for further studies. Given the increased circulating platelet counts associated with SCD, data further highlight the platelets as a therapeutic target for the treatment of SCDDoutoradoFisiopatologia MédicaDoutora em CiênciasFAPESP2017/11601-6CAPES001[s.n.]Zorzetto, Nicola Amanda Conran, 1972-Vicente, Cristina PontesCançado, Rodolfo DelfiniSoares, Andrea RibeiroSaad, Sara Teresinha OlallaUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASFabris, Fernanda Camila Zauli, 1987-20212021-11-23T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (107 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/2589FABRIS, Fernanda Camila Zauli. Aspectos da angiogênese na anemia falciforme: papel das plaquetas. 2021. 1 recurso online (107 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. 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