Utilização de vesícula de membrana externa de Haemophilus influenzae como agentes de transfecção celular

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Theizen, Thaís Holtz, 1974-
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633991
Resumo: Orientador: Marcelo Lancellotti
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spelling Utilização de vesícula de membrana externa de Haemophilus influenzae como agentes de transfecção celularUse of Haemophilus influenzae outer membrane vesicles as cellular transfections agentsTransfecçãoNanotecnologiaVesícula de membrana externaHaemophilus influenzaTransfectionNanotechnologyOuter membrane vesicleHaemophilus influenzaeOrientador: Marcelo LancellottiTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Vesículas de membrana externa (OMV), são estruturas liberadas por algumas bactérias frente ao sistema imune do hospedeiro. As membranas da vesícula externa possuem os mesmos componentes das membranas da bactéria escolhida, por isso o grande interesse em estudar essas estruturas, até porque elas não possuem cromossomos, tornando-as muito importantes. As vesículas de membranas externas (Outer Membrane Vesicles - OMV) possuem várias funções, dentre as mais importantes e a principal que nos interessa é apresentarem um importante papel na competência natural desta, no transporte de DNA exógeno para dentro da célula bacteriana e entre as diferentes bactérias. As OMVs são evaginações da membrana podendo atuar como carreadores de material nuclear exógeno. A fim de debelar todos os problemas apresentados pelas metodologias de transfecção antes descritas, resolvemos utilizar a nanotecnologia em estudos in vitro utilizando as OMVs no processo de transfecção celular. Com o advento da nanobiotecnologia, a medicina ganhou uma grande aliada para a terapêutica clínica, uma vez que, as nanopartículas seriam empregadas no diagnóstico e tratamento de diversos tipos de doenças. Desta forma resolvemos estudar as OMVs como facilitadora do processo de transfecção de material exógeno, através de obtenção de vesículas de membranas externa (OMV) a partir de linhagens de Haemophilus aegyptius 254 (Hae254) pelo processo de biofermentação em biorreator de 1 litro. Uma vez que, a utilização da OMV como um potente carreador de material exógeno e sua utilização como facilitadora do processo de transfecção celular, até o momento não foram realizados por nenhuma linha de pesquisa. Neste processo, foram obtidos resultados satisfatórios quanto ao uso das OMVs obtidas da linhagem Hae254 na transfecção de células de origem tumoral (NG97) e fibroblastos murinos (NCIH ¿ 3T3). Neste trabalho foi possível padronizar a extração das OMVs pela técnica de fermentação liquida por biorreator, determinar sua concentração através da técnica de varredura por absorbância e também comprovar pela técnica de citotoxicidade a total ausência de toxicidades as células. Devido a eficiência do teste de transfecção realizado com as OMVs Hae-254 conjugadas com plasmídeo GFP em células NG97, podemos concluir que as nanopartículas de origem biológica OMVs Hae-254 observada por experimentos de microscopia de fluorescência, tem a capacidade de transfectar células tumorais do sistema nervoso central NG97Abstract: External vesicles (OMV) are structures released by some bacteria against the immune system of the host. The membranes of the outer vesicle have the same components of the membranes of the chosen bacterium, so the great interest in studying these structures, because they do not have chromosomes, make them very important. The Outer Membrane Vesicles (OMV) have several functions, among the most important and the main one that interests us is to play an important role in the natural competence of this bacterium, in the transport of exogenous DNA into the bacterial cell and between the different bacteria. OMVs are membrane evaginations and can act as carriers of exogenous nuclear material. In order to overcome all the problems presented by the above described transfection methodologies, we decided to use nanotechnology in in vitro studies using OMVs in the process of cell transfection. With the advent of nanobiotechnology, medicine has gained a strong ally for clinical therapeutics, since nanoparticles would be used in the diagnosis and treatment of various types of diseases. In this way, we decided to study OMVs as a facilitator of the transfection process of exogenous material by obtaining external membrane vesicles (OMV) from Haemophilus aegyptius 254 (Hae254) strains by the biofermentation process and 1 liter reactor. Since the use of OMV as a potent carrier of exogenous material and its use as a facilitator of the cellular transfection process, to date they have not been performed by any line of research. In the meantime, satisfactory results were obtained regarding the use of the OMVs obtained from the Hae254 line in the transfection of cells of tumor origin (NG97) and murine fibroblasts (NCIH - 3T3). In this work it was possible to standardize the extraction of OMVs by the technique of liquid fermentation by bioreactor, to determine its concentration through the technique of absorbance scanning and also to prove by the cytotoxicity technique the total absence of toxicities of the cells. Due to the efficiency of the transfection test performed with Hae-254 OMVs conjugated to GFP plasmid on NG97 cells, we can conclude that the nanoparticles of biological origin Hae-254 OMVs observed by fluorescence microscopy experiments have the ability to transfect tumor central nervous system NG97DoutoradoFármacos, Medicamentos e Insumos para SaúdeDoutora em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos[s.n.]Lancellotti, Marcelo, 1976-Abbehausen, CamillaCereda, Cíntia Maria SaiaKawano, Daniel FábioTofoli, GiovanaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biociências e Tecnologia de Produtos BioativosUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASTheizen, Thaís Holtz, 1974-20182018-04-11T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (195 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633991THEIZEN, Thaís Holtz. Utilização de vesícula de membrana externa de Haemophilus influenzae como agentes de transfecção celular. 2018. 1 recurso online (195 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633991. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1022077Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2018-09-11T11:44:29Zoai::1022077Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2018-09-11T11:44:29Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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