Bartoneloses humanas : o desafio do diagnóstico e o uso da espectrometria de massas MALDI-TOF

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lins, Karina de Almeida, 1989-
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1640093
Resumo: Orientadores: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho, Alessandra Sussulini
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São causadas pelas Bartonella spp., bactérias gram-negativas, de crescimento lento, majoritariamente zoonóticas e transmitidas por artrópodes hematófagos. A Bartonella henselae se destaca como a espécie mais comum em infecções humanas, responsável pela doença da arranhadura do gato. Pacientes imunodeficientes são suscetíveis a condições mais graves e potencialmente fatais. O diagnóstico das infecções por Bartonella spp. é desafiador, principalmente por se tratarem de bactérias pouco conhecidas e de difícil cultivo. Não existe um método padrão ouro e a combinação de cultura e técnicas moleculares tem sido apontada como estratégia para aumento da sensibilidade, mas trata-se uma abordagem cara, morosa e trabalhosa, de modo que alternativas melhores são necessárias. Nesse contexto, a MALDI-TOF MS tem revolucionado a rotina de identificação de bactérias como um método rápido, fácil e eficiente, mas seu potencial de aplicação na investigação das Bartonella spp. ainda é pouco explorado, especialmente, em se tratando de microrganismos fastidiosos, no que diz respeito à influência do tempo de crescimento dessas bactérias em sua identificação. A presente dissertação tem seu conteúdo apresentado em formato alternativo, com os resultados descritos através de dois artigos: "Manifestações cutâneas das bartoneloses" e "A influência do tempo de crescimento na identificação de cepas de Bartonella henselae por espectrometria de massas MALDI-TOF". O primeiro artigo teve como objetivo realizar uma revisão da literatura a respeito das principais manifestações clínicas das bartoneloses humanas, sobretudo cutâneas, bem como aspectos relacionados à emergência, negligência, prevenção, diagnóstico e tratamento dessas doenças. Foi possível observar que a diversidade e complexidade das condições associadas às infecções por Bartonella spp., bem como suas limitações diagnósticas, representam um desafio para a comunidade médica e científica, de modo que mais estudos são necessários para aumentar a compreensão dessas doenças. A publicação do referido artigo é uma contribuição para difundir o conhecimento sobre as bartoneloses humanas, possibilitando que sejam mais consideradas para diagnóstico, identificadas e tratadas adequadamente. O segundo artigo teve como objetivo avaliar a influência do tempo de crescimento de cepas de B. henselae em sua identificação através da MALDI-TOF MS. Para tanto, foram obtidos espectros de referência de três cepas de B. henselae (IAL 3714, IAL 3715 e IAL 3716) com diferentes tempos de crescimento (14 e 28 dias) para criação de entradas no banco de dados. As cepas foram novamente cultivadas para obtenção de novos espectros e comparação com os primeiros pelo programa Biotyper®. Observou-se que cepas com tempos de crescimento diferentes apresentaram diferenças quantitativas e qualitativas em seus espectros de massas e, consequentemente, baixa similaridade quando comparadas pelo programa, comprometendo sua identificação. Como o tempo de crescimento não é uma varável controlável no cultivo dessas bactérias, sugeriu-se a inclusão de entradas em bancos dados com espectros de referência de colônias com tempos de crescimento diferentes para aumentar as chances de identificação. Esse estudo contribuiu para o possível estabelecimento da MALDI-TOF MS como uma alternativa promissora na identificação de cepas de Bartonella sppAbstract: Bartonellosis are neglected, emerging and globally distributed diseases that presents a wide spectrum of clinical manifestations, including dermatological, and many aspects that are still covered. They are caused by Bartonella spp., Gram-negative, slow-growing bacteria, mostly zoonotic and transmitted by blood-sucking arthropods. Bartonella henselae stands out as the most common species in human infections, responsible for cat scratch disease. Immunocompromised patients are susceptible to more serious and potentially fatal conditions. The diagnosis of Bartonella spp. infection is challenging, mainly because they are poorly known and difficult to culture bacteria. There is no a gold standard method and combination of culture and molecular techniques has been suggested to improve sensitivity, but it is an expensive, time-consuming and labor-intensive approach, so that better alternatives are required. In this context, MALDI-TOF MS has revolutionized the routine of bacteria identification as a fast, easy and efficient method, but its potential of application in the investigation of Bartonella spp. it is still unexplored, especially, considering the fastidious nature of this microorganism, with regard to the influence of the growth time of these bacteria in their identification. This dissertation has its content presented in an alternative format, with the results described through two articles: "Cutaneous manifestations of bartonellosis" and "The influence of growth time on identification of Bartonella henselae strains by MALDI-TOF mass spectrometry". The first article aimed to conduct a review of the literature regarding the main clinical manifestations of human bartonellosis, especially cutaneous, as well as aspects related to the emergence, negligence, prevention, diagnosis and treatment of these diseases. It was possible to observe that the diversity and complexity of the conditions associated with Bartonella spp. infection, as well as their diagnostic limitations, represent a challenge for the medical and scientific community, so that more studies are necessary to increase the understanding of these diseases. The publication of this article is a contribution to spread knowledge about human bartonellosis, allowing them to be further examined for diagnosis, identified and treated properly. The second article aimed to evaluate the influence of the growth time of B. henselae strains on their identification by MALDI-TOF MS. For this purpose, reference spectra of three B. henselae strains (IAL 3714, IAL 3715 and IAL 3716) with different growth times (14 and 28 days) were obtained to create database entries. The strains were then newly cultivated for obtention of new spectra and comparison with database entries through the software Biotyper®. It was observed that strains with different growth times have quantitative and qualitative differences in their mass spectra and, consequently, low similarity when compared by the software, compromising the identification. As the growth time is not a controllable variable in the culture of these bacteria, it was suggested to include database entries with reference spectra of colonies with different growth times to increase the chances of identification. This study contributed to the possible establishment of MALDI-TOF MS as a promissory alternative for the identification of Bartonella spp. strainsMestradoClínica MédicaMestra em Ciências[s.n.]Velho, Paulo Eduardo Neves Ferreira, 1966-Sussulini, Alessandra, 1981-Schreiber, Angélica ZaninelliPierrotti, Ligia CameraUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Clínica MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASLins, Karina de Almeida, 1989-20202020-11-30T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (86 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1640093LINS, Karina de Almeida. Bartoneloses humanas: o desafio do diagnóstico e o uso da espectrometria de massas MALDI-TOF. 2020. 1 recurso online (86 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1640093. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1157700Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2020-12-22T14:08:58Zoai::1157700Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2020-12-22T14:08:58Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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