Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575
Resumo: Orientador: Edson Antunes
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spelling Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humanaEffect of BAY 60-2770, activator independent of nitric oxide of soluble guanylyl cyclase in human platelet functionPlaquetas (Sangue)Óxido nítricoGuanilato ciclasePlateletsNitric oxideGuanylate cyclaseOrientador: Edson AntunesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O BAY 60-2770 constitui-se um novo ativador da guanilil ciclase solúvel (GCs) independente de óxido nítrico (NO). Há relatos de que ativadores da GCs independente de NO podem reativar esta enzima, mesmo em seu estado heme-oxidada, condição encontrada em doenças vasculares. Neste trabalho, temos por hipótese que a oxidação do grupamento heme da GCs pelo ODQ leva à potencialização dos efeitos antiplaquetários in vitro do BAY 60-2770. Foram utilizadas plaquetas humanas purificadas de voluntários sadios. Realizamos ensaios de agregação e de adesão plaquetária, bem como análise da ativação da integrina plaquetária, ?IIb?3, por citometria de fluxo. Realizamos Também ensaios de Western blotting para a quantificação protéica das subunidades ?1 e ?1 da GCs. Os níveis intracelulares de Ca2+ foram quantificados por fluorimetria, utilizando-se o fluoróforo FluoFort. O BAY 60-2770 (0,001 - 10 ?M) produziu inibição significativa da agregação plaquetária induzida pelo colágeno (2 ?g/mL) ou trombina (0,1 U/mL), sendo este efeito marcantemente potencializado pelo inibidor da GCs, ODQ (10 ?M). Em placas recobertas pelo fibrinogênio, o BAY 60-2770 (0,1 - 10 ?M) inibiu significativamente a adesão plaquetária, sendo esta inibição também potencializada pelo ODQ (10 ?M). O BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M) aumentou os níveis de GMPc e reduziu a mobilização de Ca2+, e ambos os efeitos foram potencializados pelo ODQ. O análogo permeável do GMPc, 8-Bromo-GMPc (8-Br-GMPc; 100 ?M), inibiu a agregação plaquetária e os níveis de Ca2+ de maneira ODQ-resistente. Os níveis de AMPc não foram alterados pelo BAY 60-2770. O colágeno (2 ?g/mL) e trombina (0,1 U/mL) ativaram a integrina ?IIb?3. Este efeito foi inibido pelo BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M), e potencializado pelo ODQ. Os efeitos antiplaquetários do nitroprussiato de sódio (SNP) foram totalmente revertidos pelo ODQ. O tratamento com ODQ (10 ?M) reduziu significativamente os níveis protéicos das subunidades ?1 e ?1 da GCs, os quais foram prevenidos pelo tratamento com BAY 60-2770. Os efeitos inibitórios do BAY 60-2770 sobre a agregação e adesão plaquetária, mobilização intracelular de Ca2+ e ativação da integrina ?IIb?3 foram todos potencializados em condições de heme-oxidação. O BAY 60-2770 impediu a diminuição dos níveis protéicos da GCs produzida por ODQ. Assim, o BAY 60-2770 pode ser de grande interesse terapêutico em doenças cardiovasculares associadas às complicações tromboembólicasAbstract: Nitric oxide-independent soluble guanylyl cyclase (sGC) activators reactivate the haem-oxidized enzyme in vascular diseases. This study was undertaken to investigate the anti-platelet mechanisms of the haem-independent sGC activator BAY 60-2770 in human washed platelets. The hypothesis that sGC oxidation potentiates the anti-platelet activities of BAY 60-2770 has been tested. Human washed platelet aggregation and adhesion assays, as well as flow cytometry for ?IIb?3 integrin activation and Western blot for ?1 and ?1 sGC subunits were performed. Intracellular calcium levels were monitored in platelets loaded with a fluorogenic calcium-binding dye (FluoForte). BAY 60-2770 (0.001-10 ?M) produced significant inhibition of collagen (2 ?g/ml)- and thrombin (0.1 U/ml)-induced platelet aggregation that was markedly potentiated by the sGC inhibitor ODQ (10 ?M). In fibrinogen-coated plates, BAY 60-2770 (0.1 - 10 ?M) significantly inhibited platelet adhesion, an effect potentiated by ODQ. BAY 60-2770 (0.01 - 10 ?M) increased the cGMP levels and reduced the intracellular Ca2+ levels, both of which were potentiated by ODQ. The cell-permeable cGMP analogue 8-Br-cGMP (100 ?M) inhibited platelet aggregation and Ca2+ levels in an ODQ-insensitive manner. The cAMP levels remained unchanged by BAY 60-2770. Collagen- and thrombin-induced ?IIb?3 activation was markedly inhibited by BAY 60-2770 that was further inhibited by ODQ. The effects of sodium nitroprusside (3 ?M) were all prevented by ODQ. Incubation with ODQ (10 ?M) significantly reduced the protein levels of ?1 and ?1 sGC subunits, which were prevented by BAY 60-2770. The inhibitory effects of BAY 60-2770 on aggregation, adhesion, intracellular Ca2+ levels and ?IIb?3 activation are all potentiated in haem-oxidizing conditions. BAY 60-2770 prevents ODQ-induced decrease in sGC protein levels. BAY 60-2770 could be of therapeutic interest in cardiovascular diseases associated with thrombotic complicationsMestradoFarmacologiaMestra em Farmacologia[s.n.]Antunes, Edson, 1960-Gambero, AlessandraRodrigues, Gerson JhonatanUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em FarmacologiaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASSilvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-2013info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf91 f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575SILVÉRIO, Camila Bitencourt Mendes. Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana. 2013. 91 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575. Acesso em: 15 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/902217porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T06:53:44Zoai::902217Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T06:53:44Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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