Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575
Resumo: Orientador: Edson Antunes
id UNICAMP-30_b3f9d03bedd03b9e2968c7838609d656
oai_identifier_str oai::902217
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humanaEffect of BAY 60-2770, activator independent of nitric oxide of soluble guanylyl cyclase in human platelet functionPlaquetas (Sangue)Óxido nítricoGuanilato ciclasePlateletsNitric oxideGuanylate cyclaseOrientador: Edson AntunesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O BAY 60-2770 constitui-se um novo ativador da guanilil ciclase solúvel (GCs) independente de óxido nítrico (NO). Há relatos de que ativadores da GCs independente de NO podem reativar esta enzima, mesmo em seu estado heme-oxidada, condição encontrada em doenças vasculares. Neste trabalho, temos por hipótese que a oxidação do grupamento heme da GCs pelo ODQ leva à potencialização dos efeitos antiplaquetários in vitro do BAY 60-2770. Foram utilizadas plaquetas humanas purificadas de voluntários sadios. Realizamos ensaios de agregação e de adesão plaquetária, bem como análise da ativação da integrina plaquetária, ?IIb?3, por citometria de fluxo. Realizamos Também ensaios de Western blotting para a quantificação protéica das subunidades ?1 e ?1 da GCs. Os níveis intracelulares de Ca2+ foram quantificados por fluorimetria, utilizando-se o fluoróforo FluoFort. O BAY 60-2770 (0,001 - 10 ?M) produziu inibição significativa da agregação plaquetária induzida pelo colágeno (2 ?g/mL) ou trombina (0,1 U/mL), sendo este efeito marcantemente potencializado pelo inibidor da GCs, ODQ (10 ?M). Em placas recobertas pelo fibrinogênio, o BAY 60-2770 (0,1 - 10 ?M) inibiu significativamente a adesão plaquetária, sendo esta inibição também potencializada pelo ODQ (10 ?M). O BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M) aumentou os níveis de GMPc e reduziu a mobilização de Ca2+, e ambos os efeitos foram potencializados pelo ODQ. O análogo permeável do GMPc, 8-Bromo-GMPc (8-Br-GMPc; 100 ?M), inibiu a agregação plaquetária e os níveis de Ca2+ de maneira ODQ-resistente. Os níveis de AMPc não foram alterados pelo BAY 60-2770. O colágeno (2 ?g/mL) e trombina (0,1 U/mL) ativaram a integrina ?IIb?3. Este efeito foi inibido pelo BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M), e potencializado pelo ODQ. Os efeitos antiplaquetários do nitroprussiato de sódio (SNP) foram totalmente revertidos pelo ODQ. O tratamento com ODQ (10 ?M) reduziu significativamente os níveis protéicos das subunidades ?1 e ?1 da GCs, os quais foram prevenidos pelo tratamento com BAY 60-2770. Os efeitos inibitórios do BAY 60-2770 sobre a agregação e adesão plaquetária, mobilização intracelular de Ca2+ e ativação da integrina ?IIb?3 foram todos potencializados em condições de heme-oxidação. O BAY 60-2770 impediu a diminuição dos níveis protéicos da GCs produzida por ODQ. Assim, o BAY 60-2770 pode ser de grande interesse terapêutico em doenças cardiovasculares associadas às complicações tromboembólicasAbstract: Nitric oxide-independent soluble guanylyl cyclase (sGC) activators reactivate the haem-oxidized enzyme in vascular diseases. This study was undertaken to investigate the anti-platelet mechanisms of the haem-independent sGC activator BAY 60-2770 in human washed platelets. The hypothesis that sGC oxidation potentiates the anti-platelet activities of BAY 60-2770 has been tested. Human washed platelet aggregation and adhesion assays, as well as flow cytometry for ?IIb?3 integrin activation and Western blot for ?1 and ?1 sGC subunits were performed. Intracellular calcium levels were monitored in platelets loaded with a fluorogenic calcium-binding dye (FluoForte). BAY 60-2770 (0.001-10 ?M) produced significant inhibition of collagen (2 ?g/ml)- and thrombin (0.1 U/ml)-induced platelet aggregation that was markedly potentiated by the sGC inhibitor ODQ (10 ?M). In fibrinogen-coated plates, BAY 60-2770 (0.1 - 10 ?M) significantly inhibited platelet adhesion, an effect potentiated by ODQ. BAY 60-2770 (0.01 - 10 ?M) increased the cGMP levels and reduced the intracellular Ca2+ levels, both of which were potentiated by ODQ. The cell-permeable cGMP analogue 8-Br-cGMP (100 ?M) inhibited platelet aggregation and Ca2+ levels in an ODQ-insensitive manner. The cAMP levels remained unchanged by BAY 60-2770. Collagen- and thrombin-induced ?IIb?3 activation was markedly inhibited by BAY 60-2770 that was further inhibited by ODQ. The effects of sodium nitroprusside (3 ?M) were all prevented by ODQ. Incubation with ODQ (10 ?M) significantly reduced the protein levels of ?1 and ?1 sGC subunits, which were prevented by BAY 60-2770. The inhibitory effects of BAY 60-2770 on aggregation, adhesion, intracellular Ca2+ levels and ?IIb?3 activation are all potentiated in haem-oxidizing conditions. BAY 60-2770 prevents ODQ-induced decrease in sGC protein levels. BAY 60-2770 could be of therapeutic interest in cardiovascular diseases associated with thrombotic complicationsMestradoFarmacologiaMestra em Farmacologia[s.n.]Antunes, Edson, 1960-Gambero, AlessandraRodrigues, Gerson JhonatanUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em FarmacologiaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASSilvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-2013info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf91 f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575SILVÉRIO, Camila Bitencourt Mendes. Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana. 2013. 91 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/902217porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T06:53:44Zoai::902217Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T06:53:44Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
Effect of BAY 60-2770, activator independent of nitric oxide of soluble guanylyl cyclase in human platelet function
title Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
spellingShingle Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
Silvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-
Plaquetas (Sangue)
Óxido nítrico
Guanilato ciclase
Platelets
Nitric oxide
Guanylate cyclase
title_short Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
title_full Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
title_fullStr Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
title_full_unstemmed Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
title_sort Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana
author Silvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-
author_facet Silvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Antunes, Edson, 1960-
Gambero, Alessandra
Rodrigues, Gerson Jhonatan
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
Programa de Pós-Graduação em Farmacologia
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Silvério, Camila Bitencourt Mendes, 1984-
dc.subject.por.fl_str_mv Plaquetas (Sangue)
Óxido nítrico
Guanilato ciclase
Platelets
Nitric oxide
Guanylate cyclase
topic Plaquetas (Sangue)
Óxido nítrico
Guanilato ciclase
Platelets
Nitric oxide
Guanylate cyclase
description Orientador: Edson Antunes
publishDate 2013
dc.date.none.fl_str_mv 2013
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575
SILVÉRIO, Camila Bitencourt Mendes. Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana. 2013. 91 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575. Acesso em: 3 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575
identifier_str_mv SILVÉRIO, Camila Bitencourt Mendes. Efeito do BAY 60-2770, ativador da guanilil ciclase solúvel independente de óxido nítrico, na função plaquetária humana. 2013. 91 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1619575. Acesso em: 3 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/902217
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
91 f. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809189092739514368

Registros relacionados