Purificação e caracterização de um citotoxina produzida por amostras de Enterobacter cloacae isoladas de pacientes com infecção hospitalar

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Kota, Daniel Jiro
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607212
Resumo: Orientador: Tomomasa Yano
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spelling Purificação e caracterização de um citotoxina produzida por amostras de Enterobacter cloacae isoladas de pacientes com infecção hospitalarPurification and characterization of a cytotoxin produced by Enterobacter cloacae strains isolated from patients with hospital infectionEnterobacter cloacaeCitotoxinasCélulas veroApoptoseCytotoxinsVero cellsApoptosisOrientador: Tomomasa YanoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A bactéria Enterobacter cloacae tem se destacado como importante agente de infecção hospitalar, muitas vezes levando ao óbito de pacientes imunodeprimidos. Estudando as propriedades de virulência desta bactéria em nosso laboratório, foi detectado que 18% das amostras estudadas demonstraram atividade citotóxica sobre células Vero. A citotoxina, de peso molecular de 100 KDa, foi purificada da amostra com maior atividade citotóxica (118.9) por cromatografia de troca iônica e exclusão molecular, não mostrou atividade letal em camundongos e não causou acúmulo de fluido em intestino de camundongos recém-nascidos. Além disso, não apresentou atividade leucotóxica. Quanto à sua propriedade hemolítica, constatou-se que a toxina purificada apresentou atividade hemolítica sobre eritrócitos de coelho, carneiro e boi, sendo não hemolítica sobre eritrócitos humanos, com presença ou ausência de ~mercaptoetanol. O mecanismo de ação desta toxina parece estar relacionado com o comprometimento da mitocôndria, o que ativaria a via apoptótica e a lise da membrana das células Vero. Quand~ aquecida por 100°C por 30 minutos, esta perdeu toda sua atividade citotóxica, demonstrando ser termolábil. Apesar da similaridade em sua citotoxicidade sobre as células Vero com os efeitos causados por verotoxinas, os genes STX (Shiga-Toxin) 1 e 2 e VT (Verotoxin)1 e 2, característicos de verotoxinas, não foram amplificados pela PCRAbstract: The bacterium Enterobacter cloacae has been recognized as an important infectious agent in hospitaIs, sometimes leading patients to obit. Studying its virulence properties in our laboratory, 18% of the strains were characterized as cytotoxic against Vero cells. The cytotoxin was purified from the most cytotoxic strain (118.9) by means ionic exchange and molecular exclusion chromatography techniques respectively, increasing its relative activity in 62.5%. The purified toxin did not display either lethal activity nor did it cause fluid accumulation in neonatal mice intestine. Furthermore, no leukotoxic activity was detected and regarding its hemolytic activity, the purified toxin showed hemolytic activity against rabbit, bovine and sheep erythrocytes, but not against human erythrocytes, with or without beta-mercaptoethanol. The toxicity mechanism seems to be associated with a failure in the mitochondria's function, which would activate the apoptotic pathway and membrane lyses. When heated for 100°C for 30 minutes, the toxin lost completely its cytotoxicity. Despite the fact that the toxin displayed similar effects in Vero cells compared to verotoxins, PCR did not amplified the STXl and -2 and VTl and 2 genes, found in verotoxin expressing strainsMestradoBioquímicaMestre em Biologia Funcional e Molecular[s.n.]Yano, Tomomasa, 1941-Leite, Domingos da SilvaBonafé, Carlos Francisco SampaioUniversidade Estadual de Campinas. Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biologia Funcional e MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASKota, Daniel Jiro20082008-04-04T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf53f. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607212KOTA, Daniel Jiro. Purificação e caracterização de um citotoxina produzida por amostras de Enterobacter cloacae isoladas de pacientes com infecção hospitalar. 2008. 53f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607212. Acesso em: 15 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/426144porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T05:12:49Zoai::426144Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T05:12:49Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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