Avaliação da toxicidade de anestésicos tópicos de uso odontológico por meio do modelo da membrana corioalantóica do embrião de galinha

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bezerra, Arthur Antunes Costa, 1995-
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/13469
Resumo: Orientador: Michelle Franz Montan Braga Leite
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Entretanto, modelos utilizando animais tem sido cada vez menos utilizados considerando a constante preocupação com o sofrimento dos animais envolvidos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a aplicabilidade do modelo da membrana corioalantóica (CAM) do embrião de galinha como método de análise da toxicidade de anestésicos tópicos de uso odontológico. Além disso, desenvolver uma metodologia de análise quantitativa dos efeitos irritantes causados pelas formulações anestésicas a partir das imagens pós-tratamentos da CAM, utilizando um programa computacional. O modelo experimental da CAM empregado nesse estudo seguiu a metodologia descrita no protocolo HET-CAM DB-ALM Nº 96 (ECVAM). Foram utilizados 144 ovos embrionados (n=24/formulação, divididos em quatro réplicas - n=6/réplica), incubados a 37,5 °C e UR de 55-65%, durante 10 dias. No 10° dia, foram realizados os seguintes procedimentos: inspeção dos ovos para constatação do embrião vivo (ovoscopia), confecção da janela de acesso na casca, exposição da CAM, registro de imagem inicial, aplicação de 300 µL dos controles (positivo – hidróxido de sódio; negativo – solução salina) ou 300 mg das formulações-teste (Benzotop®, Labcaína®, Lidocaína® e EMLA®) durante 3 minutos, remoção das formulações com lavagem e registro de imagem final. Os efeitos sobre os vasos da CAM (hemorragia, lise e coagulação) foram avaliados nas imagens obtidas e pontuados segundo o protocolo mencionado, e as formulações foram classificadas dentro das categorias: "não-irritante", "levemente irritante", "moderadamente irritante", "irritante" e "severamente irritante". Em acréscimo, foi desenvolvido um método de quantificação dos coágulos extravasculares encontrados nas imagens utilizando-se o programa computacional ImageJ. O número de coágulos identificados pelo ImageJ nas imagens pós-tratamentos da CAM foi comparado utilizando análise de modelos mistos generalizados, utilizando o teste t de Student, com um nível de significância estabelecido em p<0.05. De acordo com o protocolo utilizado, o controle negativo foi classificado como "não-irritante" e a classificação do controle positivo variou de "moderadamente irritante" a "irritante". Todas formulações comerciais de AT foram classificadas como "moderadamente irritantes". Com o uso do ImageJ, a média±DP do número de coágulos encontrados nas imagens para o controle positivo, Benzotop®, Labcaína®, Lidocaína® e EMLA® foi 18,37±10,66; 0,39±1,32; 0,45±1; 0,63±0,97 e 7,40 ±6,92, respectivamente. O controle negativo apresentou ausência de coágulos em todas as imagens e, por isso, seus dados foram excluídos desta análise. O controle positivo e o EMLA não diferiram entre si (p<0,05), mas apresentaram maior número de coágulos quando comparado às demais formulações comerciais (p<0,05). Estas, entretanto, não diferiram entre si (p<0,05). O modelo da CAM mostrou ser um método alternativo viável para avaliação da toxicidade de formulações de anestésicos tópicos de uso odontológico. A análise das imagens utilizando o ImageJ demonstrou ser uma ferramenta complementar ao protocolo HET-CAM DB-ALM Nº 96 promissora, pois permitiu a quantificação dos efeitos tóxicosAbstract: Topical anesthetic (TA) formulations are used in Dentistry to reduce or eliminate pain associated with the administration of local anesthetics. However, new formulations are constantly being developed as the AT currently available on the market have shown low anesthetic efficacy. Among the tests required for new formulations before their registration, toxicity testing stands out. However, models using animals have been used less and less considering the constant concern about the suffering of the animals involved. Thus, the objective of this study was to evaluate the applicability of the chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM) model as a method of analyzing the toxicity of topical anesthetics for dental use. Furthermore, develop a methodology for quantitative analysis of the irritating effects caused by anesthetic formulations based on CAM post-treatment images, using a computer program. The CAM experimental model used in this study followed the methodology described in the HET-CAM DB-ALM Nº 96 (ECVAM) protocol. 144 embryonated eggs were used (n=24/formulation, divided into four replicates - n=6/replica), incubated at 37.5 °C and RH of 55-65%, for 10 days. On the 10th day, the following procedures were carried out: inspection of the eggs to verify the embryo was alive (ovoscopy), creation of the access window in the shell, exposure of the CAM, initial image recording, application of 300 µL of controls (positive – hydroxide sodium; negative – saline solution) or 300 mg of the test formulations (Benzotop®, Labcaína®, Lidocaína® and EMLA®) for 3 minutes, removing the formulations with washing and recording the final image. The effects on CAM vessels (hemorrhage, lysis and coagulation) were evaluated in the images obtained and scored according to the aforementioned protocol, and the formulations were classified within the categories: "non-irritating", "slightly irritating", "moderately irritating" , "irritating" and "severely irritating". In addition, a method for quantifying extravascular clots found in images was developed using the ImageJ computer program. The number of clots identified by ImageJ in post-treatment CAM images was compared using generalized mixed model analysis, using the Student's t test, with a significance level set at p<0.05. According to the protocol used, the negative control was classified as "non-irritating" and the positive control classification ranged from "moderately irritating" to "irritating". All commercial AT formulations were classified as "moderately irritating". Using ImageJ, the mean±SD number of clots found in the images for the positive control, Benzotop®, Labcaína®, Lidocaína® and EMLA® was 18.37±10.66; 0.39±1.32; 0.45±1; 0.63±0.97 and 7.40 ±6.92, respectively. The negative control showed the absence of clots in all images and, therefore, its data were excluded from this analysis. The positive control and EMLA did not differ from each other (p<0.05), but presented a greater number of clots when compared to the other commercial formulations (p<0.05). These, however, did not differ from each other (p<0.05). The CAM model proved to be a viable alternative method for evaluating the toxicity of topical anesthetic formulations for dental use. Image analysis using ImageJ proved to be a promising complementary tool to the HET-CAM DB-ALM Nº 96 protocol, as it allowed the quantification of toxic effectsMestradoFisiologia OralMestre em OdontologiaCAPES001FAPESP2020/03786-9[s.n.]Franz-Montan, Michelle, 1982-Presgrave, Octávio Augusto FrançaRosalen, Pedro LuizUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)Programa de Pós-Graduação em OdontologiaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASBezerra, Arthur Antunes Costa, 1995-20232023-08-11T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (76 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/13469BEZERRA, Arthur Antunes Costa. Avaliação da toxicidade de anestésicos tópicos de uso odontológico por meio do modelo da membrana corioalantóica do embrião de galinha. 2023. 1 recurso online (76 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/13469. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1362916Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-10-31T15:46:51Zoai::1362916Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2023-10-31T15:46:51Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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