Solubilização de membranas de eritrocitos por surfactantes da serie Tween

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Preté, Paulo Sérgio Castilho
Data de Publicação: 2000
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1588757
Resumo: Orientador: Eneida de Paula
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spelling Solubilização de membranas de eritrocitos por surfactantes da serie TweenDetergentesEritrócitosHemoglobinasMembranas (Biologia)Orientador: Eneida de PaulaDissertação (mestrado) - Unversidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Surfactantes apresentam efeito concentração dependente sobre membranas de eritrócitos, podendo proteger ou solubilizar essas membranas. Neste trabalho estudamos a interação de surfactantes não-iônicos da série Tween (Polioxietileno-sorbitol) com membranas de eritrócitos humanos. Triton X1O0 (t-octilfenoxi polietoxi etanol), foi usado como controle para os ensaios hemolíticos. Inicialmente fizemos a carActerização físico-auímicA dos surfActAntes atrAvés da determinAção da CMC, e medidAs de lH-RMN, que comprovaram a purezA e composição estruturAI dos surfactantes. Estudos hemolíticos em eritrócitos humAnos (com suspensões de Ht de 5 20%) revelaram que os surfactantes da série Tween (20, 40 e 80) têm efeito protetor e lítico Acima dAS suas respectivAs CMCs (59, 27 e 12 _), enquAnto que com o Triton Xloo estes efeitos ocorrem na faixa dA sua concentrAção micelar críticA (0,25 mM). O ensaio de proteção a hemólise foi feito em condições hipotônicAs (77 mM de NaCI) e o de lise em condições isotônicas. Em Ambos ensAios mediu-se fotometricamente A saída de hemoglobina (Hb), do eritrócito. DAS concentrAções de surfActAnte parA proteção (Cprot), início (csat) e 100% de hemólise (CSOI) determinamos AS razões molares surfActante:lipídio no eritrócito para proteção e lise (RProt, Rsat, Rso respectivamente). Nos ensaios em condições isotônicas medimos também a liberação do I( intracelular (por potenciometria) como um método alternativo de quantificar a hemólise. Assim como as medidas de liberação de Hb, os ensaios de liberação de I( mostraram-se adequados aos estudos hemolíticos. Detectou-se uma estreita correlação entre os valores de csat e esol obtidos pelas duas técnicas, embora a liberação de I( ocorra em concentrações menores de surfactante, indicando que a saída de I( precede a de Hb, na hemólise. Em concentrações muito altas esses surfactantes podem induzir a oxidação da Hb, sendo que o Tween 80 tem maior poder oxidante que os demais da série (Tween 80 > Tween 40 > Tween 20) e o Triton X100 não oxida a Hb. O efeito oxidante do Tween 80 impediu a determinação dos valores de Rso1 em Ht mais altos. O tratamento proposto por Lichtenberg (1985) para a quantificação da razão efetiva surfactante:membrana para solubilização não se mostrou adequado à análise do efeito hemolítico dos surfactantes da série Tween, cujos valores de R são muito altos, caracterizando-os como pouco hemolíticosAbstract: Surfactants present hemolytic effects and depending on their concentration, they can either protect or solubilize erythrocyte membrane. In this work we have studied the interaction of nonionic surfactants from the Tween series (polyoxyethylenesorbitan) with human erythrocytes membranes. Triton Xl00 (t-octylphenoxypolyethoxyethanol) was used as a control, in hemolytic assays. To assure the purity and structural composition of the surfactants we employed CMC determination and lH-NMR characterization. Hemolytic studies with human erythrocytes (Ht 5 - 20%) showed that surfactants from the Tween series (20,40 and 80) have a protective and Iytic effect upon the membrane above their respective CMCs (59, 27 and 12 _), while Triton Xl00 presents those effects at its CMC range (0,25 mM). The "protection" assays were carried out in a hypotonic media (NaCI 77mM) and the Iysis experiments in isotonic conditions. In both assays Hb release from the erythrocyte was spectrophometrically measured. From the surfactant concentrations for protection (Ol'Ot), onset (csat) and 100% hemolysis (csol) we determined the surfactant:lipid molar ratios for protection and Iysis (RProt, Rsat, R$OI respectively). At isotonic condition we measured also the release of intracelular K'" (by potenciometry) as an alternative method for quantifying hemolysis. As well as Hb release measurements, the assays of K'"-release showed to be quite adequate for the study of hemolysis. There is a good correlation between csat and csol values obtained by the two techniques, although K'"-release occurs at lower surfactant concentrations than Hb-release. In extremely high concentrations, these surfactants induce Hb oxidation, being Tween 80 the one with the highest oxidative power, in comparison to the other Tweens (Tween 80 > Tween 40 > Tween 20). Triton X100 does not oxidise Hb. The oxidative effect of Tween 80 prevented the determination of Rso1 values in the highest Hts. The treatment proposed by Lichtenberg (1985) for the quantification of surfactant:membran ratios for solubilization was not found adequate for the analysis of the hemolytic effect of Tweens, which R values are very high, characterizing them as weak solubilizersMestradoBioquímicaMestre em Biologia Funcional e Molecular[s.n.]Paula, Eneida de, 1963-Hoffmann, Maria EdwigesMalheiros, Sonia Valeria PinheiroUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação não informadoUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASPreté, Paulo Sérgio Castilho20002000-06-06T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf106f. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1588757PRETÉ, Paulo Sérgio Castilho. Solubilização de membranas de eritrocitos por surfactantes da serie Tween. 2000. 106f. Dissertação (mestrado) - Unversidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1588757. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/192371porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T03:09:46Zoai::192371Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T03:09:46Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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