Purificação e caracterização de fosfatase acida da semente de mamona (Ricinus communis)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Granjeiro, Paulo Afonso
Data de Publicação: 1998
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1585767
Resumo: Orientador: Hiroshi Aoyama
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spelling Purificação e caracterização de fosfatase acida da semente de mamona (Ricinus communis)EnzimasPlantasCinetica de enzimasOrientador: Hiroshi AoyamaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A fração AP1 da Fosfatase Ácida (E.C. 3.1.3.2.) foi detectada e parcialmente purificada de sementes de mamona (Ricinus communis ) através de colunas cromatográficas como SP-Sephadex, DEAE-Sephadex, Sephacryl S-200 e Concanavalina A Sepharose 4B. A enzima foi purificada até a homogeneidade 2.100 vezes, com atividade específica de 230 mmol min-1. A massa molecular relativa, determinada através de coluna Shim pack diol150 (Shimadzu HPLC), foi de 60 KDa. A fração AP1 apresenta uma porção de carboidrato na estrutura proteica e se liga a resina de Concanavalina A Sepharose 4B. A fração revela apenas uma banda difusa de atividade por eletroforese em condições não desnaturantes pH 8,3. As propriedades cinéticas da fosfatase ácida de sementes de mamona foram estudadas e a enzima apresentou alta atividade em pH 5,5. O valor da Km de 0,52 mM foi determinado utilizando p-nitrofenilfosfato como substrato em pH 5,5 a 37°C. Usando o pNPP como substrato, nenhum efeito na atividade fosfatásica foi observado na presença de EDTA, DTT b3-mercaptoetanol. Porém a atividade enzimática foi inibida por fosfato inorgânico, fluoreto, molibdato, vanadato, CU2+ e Zn2+. A fosfatase ácida de sementes de mamona não catalisou reações de transfosforilação devido não se ter observado nenhuma estimulação da atividade enzimática utilizando aceptores de fosfato, como glicerol, metanol e etanolAbstract: The acid phosphatase (E.C. 3.1.3.2) AP1 form has been detected and partially purified from castor bean (Ricinus communis) seeds through SP-Sephadex, DEAE-Sephadex, Sephacry1 S-200 and Concanavalin. A chromatographies. The enzyme was purified to homogenity 2,100-fold, with a specific activity of 230 mmol min-1 . Relative molecular mass, determined by Shim pack diol150 column (Shimadzu HPLC), was found to be 60 KDa. AP1 presented a carbohydrate moiety in its proteic structure and binds to concanavalin A Sepharose. The fraction revealed a single phosphatase activity diffuse band on nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis, at pH 8.3. The acid phosphatase purified from castor bean seeds studied here presented a high activity at pH 5.5. An apparent Km of 0.52 mM was found for p nitrophenylphosphate, at pH 5.5 and 37°C. Using pNPP as substrate, no effect was observed on the acid phosphatase activity in the presence of EDT A, dithiothreitol, and b-mercaptoethanol. The enzyme was inhibited by inorganic phosphate, fluoride, vanadate, molybdate, CU2+ and Zn2+. The castor bean seeds acid phosphatase did not catalyze the transphosphorylation reaction since no stimulation was observed with inorganic phosphate acceptors, such as glycerol, methanol and ethanolMestradoBioquímicaMestre em Ciências Biológicas[s.n.]Aoyama, Hiroshi, 1943-Novello, Jose CamilloHerrera, Angela E. M.Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Ciências BiológicasUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASGranjeiro, Paulo Afonso19981998-02-18T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf83 f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1585767GRANJEIRO, Paulo Afonso. Purificação e caracterização de fosfatase acida da semente de mamona (Ricinus communis). 1998. 83 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1585767. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/128329porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T02:44:00Zoai::128329Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T02:44Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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