Estudo do ciclo intracelular de Trypanosoma cruzi e a sua relação com a atividade de compostos antichagásicos   : Study of Trypanosoma cruzi intracellular cycle and its relation with the antichagasic compound activity  

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Naves, Luisa Santos, 1991-
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1638035
Resumo: Orientador: Lucio Holanda Gondim de Freitas Junior
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Ambos apresentam diversos efeitos colaterais graves nos pacientes, sendo urgente o desenvolvimento de novas terapias para a doença. As diferentes cepas de T. cruzi apresentam variados níveis de susceptibilidade ou resistência aos fármacos referências no tratamento da doença de Chagas. O presente trabalho teve como objetivo quantificar o ciclo intracelular de dois clones in vitro (Y-cH10 e Sylvio X10/1) e desenvolver um ensaio fenotípico para essa finalidade. O estudo foi avaliado por ensaio de alto conteúdo para triagem fenotípica (High Content Screening assay) da infecção de T. cruzi em linhagem celular humana, U2OS. Foi desenvolvida um protocolo de análise no software comercial Harmony (PerkinElmer) sensível para a identificação individual das formas intracelulares do parasita T. cruzi. A quantificação do tempo de duplicação dos dois clones, Y cH10 e Sylvio X10/1, demonstrou que não houve diferenças significativas entre ambos com relação ao tempo de duplicação da população. Entretanto, o ciclo intracelular do clone Sylvio X10/1 é mais longo quando comparado ao clone Y cH10. A metodologia de análise também foi validada com sucesso na infecção em linhagem monocítica THP-1, com características fenotípicas bastante diferentes da linhagem U2OS. O tempo de duplicação do clone do clone Y cH10 não apresentou diferenças significativas nas duas linhagens celulares diferentes, U2OS e THP-1, que estavam em condições de cultivo diferentes. Desenvolveu-se nesse estudo, um método de análise de imagens mais sensível para a identificação das formas intracelulares do parasita, que poderá ser aplicado em estudos da relação do tempo de duplicação de cada clone com a atividade de compostos antichagásicosAbstract: The protozoan Trypanosoma cruzi is the etiologic agent of Chagas disease, a chronic infection that affects more than eight million people in Latin America. The evolution of Chagas disease usually leads to an asymptomatic acute phase and may result in severe complications in the chronic phase. There are no vaccines and limited chemotherapy options for Chagas disease, which are benznidazole and nifurtimox. Both have several serious side effects in patients, and the development of new therapies for the disease is urgent. The different strains of T. cruzi present varying levels of susceptibility or resistance to references drugs. The present work aimed at quantifying the intracellular cycle of two clones in vitro (Y-cH10 and Sylvio X10 / 1) and develop a phenotypic assay for this purpose. The study was evaluated by high content screening assay analysis of the T. cruzi infection of human cell line, U2OS. The analysis developed in a commercial software, Harmony (PerkinElmer), was sensitive in the identification of the intracellular forms of T. cruzi parasite. The quantification of the doubling time of the two clones was performed and no significant differences were observed between them. However, the Sylvio X10/1 intracellular clone cycle is longer compared to the Y cH10 clone. The analysis methodology was also successfully evaluated in the infection of a monocyte cell line, THP-1, with very different phenotypic characteristics of the U2OS cell line. The duplication time of the Y strain clone did not show significant difference in the two different cell lines, U2OS and THP-1, which were under different culture conditions. In this study, a method of image analysis more sensitive for the identification of intracellular forms of the parasite was developed, and this methodology could be applied in studies of the relation of the doubling time of each clone with the activity of antichagasic compoundsMestradoMicrobiologiaMestra em Genética e Biologia MolecularCNPQ132049/2016-3CAPES[s.n.]Freitas-Junior, Lucio Holanda, 1968-Miguel, Danilo CicconeBarros, Roberto Rudge de MoraesUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASNaves, Luisa Santos, 1991-20182018-08-31T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (60 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1638035NAVES, Luisa Santos. Estudo do ciclo intracelular de Trypanosoma cruzi e a sua relação com a atividade de compostos antichagásicos   : Study of Trypanosoma cruzi intracellular cycle and its relation with the antichagasic compound activity   . 2018. 1 recurso online (60 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1638035. 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