Desregulação no perfil de expressão gênica das vias de apoptose relacionadas ao início dos sintomas na adolescência da variante TNFRSF13B/TACI p.C104R

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Sabino, Janine Schincariol, 1982-
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/4299
Resumo: Orientadores: Maria Marluce dos Santos Vilela, Marcelo Teocchi
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spelling Desregulação no perfil de expressão gênica das vias de apoptose relacionadas ao início dos sintomas na adolescência da variante TNFRSF13B/TACI p.C104RDeregulation in the gene expression of apoptosis pathways related to the onset of symptoms in adolescence of the TNFRSF13B;TACI p.C104R variantTNFRSF13BApoptoseExpressão gênicaAutoimunidadeDisturbios linfoproliferativosTNFRSF13BApoptosisGene expressionAutoimmunityLymphoproliferative disordersOrientadores: Maria Marluce dos Santos Vilela, Marcelo TeocchiTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A imunodeficiência comum variável (ICV) é caracterizada por infecções recorrentes, hipogamaglobulinemia de IgA e IgG ou IgM e IgG, baixa resposta à antígenos vacinais, número normal ou baixo de linfócitos B, defeitos na produção de citocinas e desregulação imunológica, com maior risco para doença autoimune, doença intersticial pulmonar (ILD) e granulomatosa (GLID), esplenomegalia e linfadenopatia benigna e maligna. Nosso objetivo é identificar em uma coorte de 18 pacientes com fenótipo de linfoproliferação, autoimunidade e hipogamaglobulinemia, o diagnóstico genético molecular através do Sequenciamento Total do Exoma (STE). Objetivos específicos, nos pacientes com mutação no gene TNFRSF13B, posição p.C104R, analisar: os membros da família; a expressão da proteína CD267 nos linfócitos B; as células viáveis e em apoptose; a expressão gênica das vias intrínseca e extrínseca da apoptose e no plasma, avaliar IL-2, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10 e TGF-?. Sujeitos: Após aprovação pelo Comitê de Ética e Pesquisa- UNICAMP, foram selecionados seis indivíduos de três famílias não aparentadas com linfoproliferação, autoimunidade e hipogamaglobulinemia, sob acompanhamento na Divisão de Alergia-Imunologia Pediátrica da UNICAMP. DNA genômico do sangue foi extraído para o STE e a validação da variante foi realizada por sequenciamento Sanger. Para análise dos efeitos da variante TNFRSF13B na expressão dos genes envolvidos nas vias de sinalização da apoptose, foi realizado extração de RNA para RT-PCR, Array em placa e expressão gênica única. Para expressão da proteína de membrana CD267 (TACI) e o ensaio de apoptose foi utilizado a citometria de fluxo e para dosagem no plasma de IL-2, IL-5, IL-6, IL-8 e IL-10, a técnica de Multiplex. Resultados e discussão: Pacientes e suas mães assintomáticas apresentam a variante p.C104R no gene TNFRSF13B, sugerindo ampliar as investigações para entendimento da fisiopatologia da doença. Em relação aos controles, os probandos apresentaram menor número de CD19+CD27+, redução da expressão de CD267+ e maior número de células viáveis, mas sem diferenças estatisticamente significativas. TNFRSF13B codifica a proteína TACI, com funções na sobrevida, apoptose, diferenciação dos linfócitos B e por recombinação somática (CSR) atua na mudança de IgM para IgA e IgG. O STE mostrou ausência de variantes entre os genes investigados das vias de sinalização da apoptose no array. Contudo, o estudo da expressão gênica revelou hiperexpressão de genes próapoptóticos BCL2L11, BCL2L13, BNIP3L, TRADD e NOD2, e de genes antiapoptóticos BCL2L1, BCL2A1, BIRC3, BIRC5, BIRC6, BIRC8, NAIP e TNFRSF1B como também hipoexpressão de genes proapoptóticos APAF1, BCL10, BOK, CARD6, CASP3, CASP4, CASP5, CASP6, CASP8, FASL, TNFRSF21, DAPK1, DIABLO, NLRP1 e de genes antiapoptóticos BCL2A1, BCL2, BIRC3, BIRC6, BIRC8, CHUK, RIPK2 e XIAP. Esta desregulação predominou entre os genes próapoptóticos da via intrínseca mitocondrial. O probando com fenótipo mais grave de linfoproliferação recidivante apresentava menor número de genes desregulados e aquele com fenótipo leve, maior número de genes desregulados. Especulamos que a desregulação na expressão gênica seja um mecanismo compensatório positivo do organismo, na tentativa de controlar a doença. Nossos resultados e os da literatura sobre os efeitos da variante p.C104R, sugerem que além da sua haploinsuficiência e penetrância variável, ela pode ser deficiente na sinalização da via canônica NF-?B e exacerbar a sinalização da via não canônica, promovendo autoreatividade e linfoproliferação de linfócitos B naive através da hiperexpressão de genes antiapoptóticos BCL2L1, BCL2A1, BIRC3, BIRC5, BIRC6, BIRC8, NAIP e TNFRSF1B induzindo o organismo a usar mecanismos compensatórios na tentativa de alcançar uma regulaçãoAbstract: Common variable immunodeficiency (CVI) is characterized by recurrent infections, hypogammaglobulinemia of IgA and IgG or IgM and IgG, low response to vaccine antigens, normal or low number of B lymphocytes, defects in cytokine production and immune dysregulation, with increased risk for autoimmune disease, interstitial lung disease (ILD) and granulomatous disease (GLID), splenomegaly, and benign and malignant lymphadenopathy. Our objective is to identify, in a cohort of 18 patients with lymphoproliferation, autoimmunity and hypogammaglobulinemia phenotype, the molecular genetic diagnosis through Total Exome Sequencing (STE). As specific objectives, in patients with a mutation in the TNFRSF13B gene, in position p.C104R, to analyze: family members; the expression of the CD267 protein on B lymphocytes; viable and apoptotic cells; gene expression of the intrinsic and extrinsic pathways of apoptosis and in plasma, evaluate IL-2, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10 and TGF-?. Subjects: After approval by the Ethics and Research Committee - UNICAMP, six individuals from three unrelated families were selected from a cohort of 18 patients with lymphoproliferation, autoimmunity and hypogammaglobulinemia, under follow-up at the Division of Pediatric Allergy-Immunology at UNICAMP. Blood genomic DNA was extracted for STE and variant validation was performed by Sanger sequencing. To analyze the effects of the TNFRSF13B variant on the expression of genes involved in apoptosis signaling pathways, RNA extraction for RT-PCR, plate array and single gene expression were performed. For expression of CD267 membrane protein (TACI) and the apoptosis assay, flow cytometry was used and for plasma dosage of IL-2, IL-5, IL-6, IL-8 and IL-10, the technique of Multiplex. Results and discussion: Patients and their asymptomatic mothers have the p.C104R variant in the TNFRSF13B gene, suggesting further investigations to understand the pathophysiology of the disease. Compared to controls, the probands had a lower number of CD19+CD27+, reduced expression of CD267+ and a higher number of viable cells, but without statistically significant differences. TNFRSF13B encodes the TACI protein, with functions in survival, apoptosis, differentiation of B lymphocytes and by somatic recombination (CSR) it acts in the change from IgM to IgA and IgG. STE showed absence of variants among the investigated genes of the apoptosis signaling pathways in the array. However, the study of gene expression revealed hyperexpression of proapoptotic genes BCL2L11, BCL2L13, BNIP3L, TRADD and NOD2, and antiapoptotic genes BCL2L1, BCL2A1, BIRC3, BIRC5, BIRC6, BIRC8, NAIP1, TNFRSF1B and hypoexpression of proapoptotic genes APAF1, BCL10, BOK, CARD6, CASP3, CASP4, CASP5, CASP6, CASP8, FASL, TNFRSF21, DAPK1, DIABLO, NLRP1 and anti-apoptotic genes BCL2A1, BCL2, BIRC3, BIRC6, BIRC8 CHUK, RIPK2 and XIAP. Dysregulation predominated among proapoptotic genes of the intrinsic mitochondrial pathway. The proband with the most severe phenotype of relapsing lymphoproliferation had a lower number of dysregulated genes, and the one with a mild phenotype, a higher number of dysregulated genes. We speculate that the dysregulation in gene expression is a positive compensatory mechanism of the organism, in an attempt to control the disease. Our results, and those in the literature on the effects of the p.C104R variant, suggest that, in addition to its haploinsufficiency and variable penetrance, it may be deficient in NF-?B canonical pathway signaling and exacerbate non-canonical pathway signaling, promoting lymphocyte autoreactivity and lymphoproliferation B naive through hyper-expression of anti-apoptotic genes BCL2L1, BCL2A1, BIRC3, BIRC5, BIRC6, BIRC8, NAIP and TNFRSF1B inducing the organism to use compensatory mechanisms in an attempt to achieve regulationDoutoradoSaúde da Criança e do AdolescenteDoutora em CiênciasFAPESP2016/25615-6[s.n.]Vilela, Maria Marluce dos Santos, 1947-Teocchi, Marcelo Ananias, 1980-Vasconcelos, Dewton de MoraesMarques, Otavio CabralOzelo, Margareth CastroSaad, Sara Teresinha OlallaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do AdolescenteUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASSabino, Janine Schincariol, 1982-20212021-12-15T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (77 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/4299SABINO, Janine Schincariol. Desregulação no perfil de expressão gênica das vias de apoptose relacionadas ao início dos sintomas na adolescência da variante TNFRSF13B/TACI p.C104R. 2021. 1 recurso online (77 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/4299. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1242696Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-06-01T11:23:02Zoai::1242696Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2022-06-01T11:23:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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