Inibidores de transcruptase reserva de virus de mielobrastose de aves

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Juca, Marilena Bezerra
Data de Publicação: 1998
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1586090
Resumo: Orientador: Hiroshi Aoyama
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spelling Inibidores de transcruptase reserva de virus de mielobrastose de avesInibidores enzimaticosCinetica de enzimasDNA polimerasesOrientador: Hiroshi AoyamaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O bloqueio da replicação retroviral é realizado principalmente através da inibição da transcriptase reversa. Novobiocina, brometo de etídeo, tetrametil brometo de etídeo, os alcalóides metoximetilvoacalotina, laurifolina e erisodina e o composto platínico Pt(BCP)(CBDCA) inibiram a atividade DNA polimerase da transcriptase reversa de vírus de mieloblastose de aves (TR de AMV). Independentemente da matriz utilizada: DNA ativado, poli(rA)(dT)12 e poli(rC)(dG), 0,5 mM de novobiocina inibiu 50% da atividade enzimática (IC50). O valor de IC50 para DNA polimerase a era o mesmo obtido para transcriptase reversa, significando que a droga não era específica para a enzima viral. A inibição por brometo de etídeo dependia do grupo substituinte na posição 2' do açúcar, onde a substituição de OH por Fluor no derivado poliadenílico como matriz, tornava a reação catalisada por transcriptase reversa menos susceptível à ação deste inibidor. Este padrão de inibição também foi observado com o composto platínico Pt(BCP)(CBDCA). Tanto para brometo de etídeo quanto para o seu análogo tetrametil brometo de etídeo, inibições mais eficientes foram obtidas quando se utilizou análogos de poli(rA)(dT)12 como matrizes. A eficiência da inibição pelos derivados etídeos era dependente da matriz poli(rA)(dT)12, poli(dAFI)(dT)12, poli(Am)(dT)12, poli(dA)(dT)12 e do cátion divalente (Mg2+, Mn2+, C02+) utilizado. O efeito inibitório do alcalóide metoximetilvoacalotina foi alterado pela natureza da matriz-iniciador tendo-se obtido os seguintes valores de IC50, 5,0; 3,5 e 1,0 mM para poli(rA)(dT)12, DNA ativado e poli(rC)(dG)12, respectivamente. O alcalóide laurifolina inibiu consideravelmente a TR de AMV mas não houve alterações significativas quando a matriz-iniciador poli(rA)(dT)12 foi substituida por poli(dAFI)(dT)12 como também quando Mg2+ foi substituido por Mn2+. Laurifolina é um inibidor não competitivo e, provavelmente, liga-se à enzima com alta afinidade (Ki = 0,66 µM). Laurifolina é, portanto, um efetivo inibidor da TR de AMV e um promissor agente antiretroviral. O alcalóide erisodina apresentou uma inibição mais apreciável na reação de TR dirigida por poli(rA)(dT)12. DMSO ativou a TR de AMV até a concentração de 4%. A maiores concentrações, este solvente inibiu a enzima em presença de poli(rA)(dT)12 e DNA ativado. Com poli(dAFI)(dT)12 esta ativação alcançou um máximo à 20% de DMSO, inibindo a maiores concentrações. O efeito ativador do DMSO pode estar relacionado com o decréscimo do valor de Km de 9,1µg/mI na ausência do solvente para 3,3 µg/rnl na presença do solvente. DMSO não protegeu a TR da inativação durante quatro horas a 0°C. Oito compostos platínicos foram anaIizados. Pt(BCP)(CBDCA) inibiu consideravelmente a enzima tendo discriminado a atividade DNA polimerase RNA-dependente (RDDP) da atividade DNA polimerase DNA-dependente (DDDP). Análises cinéticas revelaram que o tipo de inibição da TR de AMV para os compostos estudados era não competitiva, com exceção do alcalóide erisodina e do composto platínico Pt(BCP)(CBDCA) que apresentaram uma inibição competitiva em relação a poli(rA)(dT)12 e dTTP, respectivamenteAbstract: The blockage of retroviral replication is performed mainly through the reverse transcriptase inhibition. Novobiocin, ethidium bromide, tetramethyl ethidium bromide, the alkaloids methoxymethylvoachalotine, laurifoline, erisodine, and the platinum compound Pt(BCP)(CBDCA) inhibited the DNA polymerase activity of avian myeloblastosis virus reverse transcriptase (AMV RT). lndependently ofthe template used: activated DNA, poly(rA)(dT)12 and poly(rC)(dG)12, 0.5 mM novobiocin inhibited 50% of the enzyme activity (IC50). This drug was not specific for the viral enzyme since the IC50 value for DNA polymerase a was similar to that obtained for reverse transcriptase. The inhibition ofRT by ethidium bromide depended on the 2' -substituent in the sugar moiety, where the substitution of OR by fluorine on the template polyadenilic acid (poly A), became the reaction catalyzed by reverse transcriptase less sensitive to the action of this inhibitor. A similar pattem of the inhibition also was observed with the platinum compound Pt(BCP)(CBDCA). Ethidium bromide and its analog tetramethyl ethidium bromide more efficiently inhibited the reaction, when poly(A) analogs were used as templates. The efficiency of inhibition for the ethidium derivates was dependent on the templates poly(rA)(dT)12, poly(dAFI)(dT)12, poly(Am)(dT)12, poly(dA)(dT)12 and on the divalent cations (Mg2+, Mn2+, Co2+) utilized. The inhibitory effect by the alkaloid methoxymethylvoachalotine was also template-primer dependent and the following IC50 values were obtained: 5.0; 3.5 and 1.0 mM for poly(rA)(dT)12, activated DNA and poly(rC)(dG)12, respectively. The alkaloid laurifoline considerably inhibited the AMV RT but there were no significative differences when the template-primer poly(rA)(dT)12 was substituted for poly(dAFl)(dT)12 and when Mg2+ was substituted for Mn2+. Laurifoline was a non-competitive inhibitor and, probably binds to the enzyme with high affinity (Ki = 0.66 µM). Therefore, laurifoline, an effective inhibitor for the AMV R T, could be a promising antiretroviral agent. The aIkaloid erisodine showed a more appreciable inhibition on the poly(rA)(dT)12-directed RT reaction. DMSO activated the AMV RT at concentrations up to 4%. At higher concentrations, this solvent inhibited the enzyme in the presence of poly(rA)(dT)12 or activated DNA. With poly(dAFl)(dT)12 this activation reached a maximum at 20% DMSO, inhibiting at higher concentrations. The activator effect of DMSO could be related to a decrease in the Km value from 9.1µg/mI in the absence to 3.3 in the presence of the solvent. DMSO did not protect the RT from inactivation, during four hours, at 0°C. From eight platinum compounds analyzed, Pt(BCP)(CBDCA) considerably inhibited the enzyme activity, discriminating the RNA- from the DNA-dependent DNA polymerase activities. Kinetic analysis reveled that, with the exception of the alkaloid erisodine and the platinum compound Pt(BCP)(CBDCA) that presented competitive inhibitions relation to poly(rA)(dT)12 and dTTP, respectively, the inhibitions of the AMV RT by the other compounds studied in this work were of the non-competitive typeDoutoradoBioquímicaDoutor em Ciências Biológicas[s.n.]Aoyama, Hiroshi, 1943-Sato, Helia HarumiNovello, Jose CamilloSodek, LadaslavMarques, Maria Risoleta FreireUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Ciências BiológicasUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASJuca, Marilena Bezerra19981998-06-05T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf117f. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1586090JUCA, Marilena Bezerra. Inibidores de transcruptase reserva de virus de mielobrastose de aves. 1998. 117f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1586090. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/131234porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T02:46:21Zoai::131234Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T02:46:21Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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