COMPARAÇÃO ENTRE DOIS MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE DNA DE Leifsonia xyli subsp. xyli

• Autor(a) principal: BARBIERI, Bruna Rafaela
• Data de Publicação: 2015
• Outros Autores: BRESCANSIN, Mariana Gomes, SOARES, Larissa Siqueira, NANAMI, Danielle Sayuri Yoshida, ZANUTTO, Carlos Alexandre, NUNES, William Mário de Carvalho
• Tipo de documento: Artigo
• Título da fonte: Repositório Digital Unicesumar
• Texto Completo: http://rdu.unicesumar.edu.br//handle/123456789/2663
• topic: Bactéria; PCR; Raquitismo-da-soqueira; Cana-de-açúcar

Responsável por ocasionar perdas de até 30% da produtividade, o raquitismo-da-soqueira causado pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, é uma das doenças mais importantes para a cultura da cana-de-açúcar. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extração de DNA da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli afim de formular uma resposta rápida sobre a presença da doença em áreas de cana-de-açúcar, visto que a mesma não apresenta sintomas típicos. Foram coletadas amostras de cana-de-açúcar de áreas sabidamente infestadas com a doença. Foi coletado o colmo mais velho da touceira a ser amostrada e a seiva foi extraída com o auxílio de um espremedor de limão. A extração do DNA total foi realizada a partir do caldo extraído e seguindo protocolo específico para a bactéria elaborado por Gao et al. (2008) com modificações, e também de acordo com protocolo CTAB adaptado e modificado de Murray e Thompson (1980), que é um método comum de extração de DNA. Após a extração as amostras foram submetidas à amplificação por meio de PCR convencional e o produto analisado em eletroforese com gel de agarose a 1% corado com brometo de etídio. O produto da amplificação foi revelado em fotocumentador equipado com luz ultravioleta e filtro de brometo. O experimento foi repetido três vezes e o resultado encontrado foi o mesmo em todas as repetições. Os resultados foram analisados com base na presença de bandas no gel e indicaram que a extração e amplificação é mais eficaz quando se faz uso de protocolo geral, como o CTAB, do que quando se utiliza protocolo específico para a bactéria em estudo. Desta forma, admite-se que o método de extração CTAB é o método mais eficaz para extrair o DNA da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, embora não seja específico para a mesma.