Produção e avaliação de anticorpos policlonais para vírus bovinos

• Autor(a) principal: Lima, Tatiane Goulart de
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIPAMPA
• Texto Completo: http://dspace.unipampa.edu.br/jspui/handle/riu/179
• topic: Vírus bovinos; Diagnóstico; Imunoensaios; Anticorpos policlonais; Bovine viruses; Diagnostic; Immunoassay; Polyclonal antibodies

Os vírus são importantes agentes patogênicos de várias espécies animais, entre elas bovinos. No Brasil, diversos agentes virais foram descritos causando infecções no rebanho bovino, e produzindo perdas econômicas significativas. A identificação dos animais infectados por um vírus pode ser realizada de diferentes formas; no entanto, a confirmação definitiva requer a demonstração do agente ou da resposta imune. Para isto, vários métodos com capacidade de detectar a partícula viral, atividade biológica, genoma, antígenos virais, ou então a resposta imune específica foram desenvolvidos. Os imunoensaios são testes amplamente utilizados na rotina laboratorial para detecção de antígenos virais em amostras clínicas ou de pesquisa. Estes ensaios apresentam boa sensibilidade, especificidade e facilidade de execução. A metodologia dos imunoensaios tem como base, o emprego de anticorpos monoclonais ou policlonais específicos para os antígenos virais. Assim sendo, o objetivo do presente estudo foi produzir anticorpos policlonais para alguns vírus bovinos, e avaliar a reatividade destes em testes de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Para isto, cepas e/ou isolados do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), herpesvírus bovino tipo 2 (BoHV-2), herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), herpesvírus bovino tipo 5 gE deletado (BoHV-5 gEΔ), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus da vaccínia (VACV) foram amplificados em cultivo celular e o sobrenadante utilizado para imunizar coelhos. Os animais foram imunizados cinco vezes pela via subcutânea, e cinco dias após o último reforço coletou-se sangue. O soro foi separado do sangue por centrifugação. O soro foi diluído em PBS (1:100 a 1:204.800) e utilizado como anticorpo primário nos ensaios de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. A diluição de trabalho foi selecionada pela diluição que produziu reação específica nas células infectadas, e sinal fraco ou ausente nas células controle. Os antissoros apresentaram maior reatividade na técnica de imunoperoxidase do que na imunofluorescência e slot blot. Ainda, para os antissoros do BoHV-1, BoHV-5, BVDV e BRSV demonstrou-se a reatividade com amostras heterólogas nos ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os anticorpos policlonais produzidos em coelhos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos, o que foi detectado pela reatividade nos ensaios de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Desta maneira, estes reagentes podem ser considerados uma importante ferramenta para a detecção e caracterização de vários vírus bovinos na rotina de diagnóstico e pesquisa.