Novo modelo de interação célula epitelial e célula hematopoiética utilizando a linhagem HEK 293

• Autor(a) principal: Santos, Michele Goulart dos
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIPAMPA
• Texto Completo: http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/4548
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Cultura celular; Interação célula-célula; HEK 293; Jurkat; Cell culture; Cell-cell interaction

A adesão celular é fundamental na união de células para a formação de diferentes tecidos, motilidade celular e resposta imunológica dos seres vivos. A composição desses tecidos, e sua organização em órgãos, é determinada por interações moleculares em nível celular, devido à expressão de um grande número de moléculas de adesão. Modelos de adesão célula-célula usando cultivo celular, são de grande importância no estudo de diversas doenças, como isquemias, doenças inflamatórias e câncer. Exemplos de adesão celular mais utilizados são com células Jurkat e células endoteliais ativadas, como as HUVEC, CACO-2 e também células mensequimais. Um modelo alternativo para interação célula endotelial-hematopoiética, pode ser obtido com células HEK 293, uma linhagem endotelial amplamente utilizada como ferramenta de expressão para proteínas recombinantes. Sabendo que a expressão aumentada das moléculas de adesão possui um papel crítico na patogenicidade de diversas doenças, o desenvolvimento de novos modelos de interação celular de fácil cultivo e manipulação genética se faze necessário. Por essa razão, este trabalho buscou estabelecer um novo modelo de estudo para interação célula epitelial e célula hematopoiética, utilizando a linhagem de células HEK 293. Foram testados diferentes concentrações de células HEK 293 cultivadas durante 24 e 48 horas com a finalidade de obter a melhor concentração celular para a manutenção das células aderentes na placa. Foi desenvolvido também testes de coloração com os corantes rodamina B e carboxifluoresceína em diferentes concentrações, no intuito de se estabelecer a melhor marcação para ambas as linhagens. O ensaio de interação célula-célula foi então realizado e analisado por meio de microscopia de fluorescência. Os resultados obtidos sugeriram que a concentração ideal de células HEK 293 foi a de 5x104 células/ml em 24 horas, demonstrando ser uma confluência suficiente para que as células permanecessem aderidas durante as lavagens dos poços. Quanto às marcações, foi estabelecido que para a linhagem endotelial a melhor marcação foi com 40µM de rodamina B, e para a linhagem linfocítica a marcação suficiente foi a de 500nM do corante carboxifluoresceína. A interação entre as células foi alcançada nas diferentes concentrações, e a distinção entre as linhagens foi possível devido aos corantes possuírem comprimento de emissão da luz diferentes e não sobrepostos. Portanto a escolha dos corantes e suas respectivas concentrações, foram eficientes para esse modelo de interação; contudo, outros estudos voltados para as células HEK 293 se fazem necessários, com o propósito de aumentar essa aderência celular, além de desenvolver um método quantitativo para avaliar a interação em futuros experimentos.