Otimização de protocolo para a amplificação via PCR de marcadores SSR em Eugenia uniflora l. (Myrtaceae)

• Autor(a) principal: Beise, Dalvan Carlos
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIPAMPA
• Texto Completo: http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/4525
• topic: CNPQ::CIENCIAS SOCIAIS APLICADAS; Myrtaceae; Fragmentação de ambiente; Pitangueira; Variação individual; Marcadores SSR; SSR markers; Environmental fragmentation; Individual variation

A espécie Eugenia uniflora L., popularmente conhecida como pitangueira, pertence à família Myrtaceae e apresenta ampla distribuição pela América do Sul, sendo nativa para os biomas Mata Atlântica e Pampa. A pitangueira possui importância significativa pela grande apreciação de seus frutos tanto pelo homem quanto pela fauna em geral. Tendo sido empregada pela medicina popular há várias gerações, atualmente o setor econômico tem notado sua qualidade para a confecção de produtos alimentícios, farmacológicos e cosméticos. Devido essa possibilidade de exploração, consequentemente haverá redução das áreas onde a mesma ocorre naturalmente. Estudos com base genético-molecular são fundamentais para compreensão dos efeitos causados pela da fragmentação e degradação do ambiente, refletidos no comportamento populacional das espécies como um todo. Para isso, é necessário desenvolver ferramentas capazes de elucidar as variações de indivíduos em nível populacional. Por esses motivos, o presente trabalho teve como objetivo testar e avaliar a eficiência da amplificação dos locus microssatélites específicos para a espécie E. uniflora, previamente caracterizados e validados in silico. Para amplificação dos 24 loci avaliados, utilizou-se indivíduos pertencentes a uma população natural de um fragmento florestal de Mata Atlântica. Dentre os loci avaliados, 12 mostraram-se eficientes, podendo ser diretamente indicados para aplicações futuras. Para os que não apresentaram bons resultados, é necessária a realização de novos testes e ajustes em relação aos protocolos adotados. Por fim, apenas sete foram descartados por não apresentarem amplificação. Esta avaliação foi baseada na amplificação dos loci visualizados através de eletroforese em gel de agarose 2%. Ainda, buscou-se otimizar um protocolo de PCR (Reação em cadeia da polimerase) visando o aumento do número de loci amplificados. A origem genômica dos loci foi caracterizada por meio de um BLAST (Ferramenta básica de pesquisa de alinhamento local) realizado no banco de dados online NCBI, demonstrando uma alta similaridade das sequências alinhadas com a espécie Eucalyptus grandis, também pertencente à família Myrtaceae.