Desenvolvimento de um meio quimicamente definido e avaliação do efeito de um peptídeo tóxico em drosophila melanogaster

• Autor(a) principal: Rangel, Darlene Lopes
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIPAMPA
• Texto Completo: http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/4537
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Eletroforese; Mosca da fruta; Ureases; Jaburetox; Electrophoresis; fruit fly

Ureases são enzimas níquel-dependentes que catalisam a hidrólise da ureia em amônia e dióxido de carbono e estão envolvidas na biodisponibilidade de nitrogênio e em mecanismos de defesa contra predadores e patógenos em plantas. Estão presentes em plantas, fungos e bactérias, mas não são sintetizadas por animais. Canavalia ensiformis, uma leguminosa, apresenta três isoformas de ureases: JBURE-I, JBURE-II e CNTX, sendo JBURE-I ou somente JBU (jack bean urease) a mais abundante. A atividade inseticida de JBU depende da liberação de um peptídeo - Jaburetox (JBTX) - cuja quebra é realizada por enzimas catepsinas dos insetos. JBTX apresenta efeitos fungitóxicos, entomotóxicos, neurotóxicos e antimicrobiano. A toxicidade de JBTX foi descrita para insetos das ordens Lepidoptera, Blattodea e Hemiptera, cujo efeito neurotóxico se dá pela ligação do peptídeo a células neuronais, aumentando a atividade de UDP-N-acetilglucosamina pirofosforilase e inibindo a óxido nítrico sintase. Também é relatado que JBTX atua sobre os túbulos de Malpighi de Rhodnius prolixus, inibindo a diurese por alterações nos níveis de cGMP e no potencial transmembrana. Contudo, investigações acerca da toxicidade em Drosophila melanogaster inexistem na literatura. D. melanogaster, popularmente conhecida como mosca da fruta, é um organismo modelo por quase um século, apresentando uma gama de vantagens como ciclo de vida curto, baixo custo de manutenção, facilidade de manuseio, além de ter seu genoma sequenciado e suas proteínas anotadas, viabilizando abordagens proteômicas. Neste trabalho objetivamos estabelecer um meio quimicamente definido, bem como eleger qual o melhor aditivo para uma maior taxa de oviposição. Também objetivamos investigar como o JBTX age no sistema nervoso central de larvas de D. melanogaster. O meio quimicamente definido que possibilitou o total desenvolvimento das moscas foi o meio composto apenas de ágar, sacarose, fermento e metilparabeno, que nutriu as larvas de D. melanogaster até estas atingirem o estágio adulto. O aditivo com a melhor taxa de oviposição foi o etanol (5%), apresentando aproximadamente 700 ovos, diferentemente do controle que apresentou aproximadamente 500 ovos e do ácido propiônico (1%) com aproximadamente 200 ovos, demonstrando assim que um aditivo mais semelhante ao habitat natural de oviposição é mais atrativo. Eletroforese unidimensional foi realizada para a visualização de mudanças significativas no perfil eletroforético do sistema nervoso central de larvas de D. melanogaster sobre a ação do JBTX, porém devido a uma eletroforese aberrante, não foram possíveis análises quantitativas ou qualitativa das proteínas, porém foi possível a visualizar a presença de proteínas no gel.