Identificação e caracterização de isoformas de fosfomonohidrolases presentes na cauda de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus) durante o desenvolvimento larval

• Autor(a) principal: Gonçalves, Adriano Marques [UNESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/150306
• topic: Morte celular; Metamorfose; Fosfatases; Mitocôndria; Anuro; Cell death; Metamorphosis; Mitochondria; Phosphatases; Anuran

A metamorfose dos anfíbios é um processo altamente regulado que envolve a participação de hormônios e biomoléculas na morte celular e absorção da cauda, a qual libera nutrientes para as transformações morfofisiológicas necessárias para a ocupação do meio terrestre. Dentre os nutrientes liberados, o fosfato é essencial para a síntese de ATP, membranas biológicas, ácidos nucleicos e metabólitos fosforilados, bem como para a regulação de processos degradativos e da atividade de enzimas. Neste sentido, a identificação e caracterização cinética das fosfatases que participam da absorção da cauda de girinos de Lithobates catesbeianus, durante a passagem da fase larval aquática para a adulta terrestre, poderão contribuir para a compreensão dos eventos envolvidos na morte celular e na liberação de nutrientes. O estudo revelou aumento da atividade das fosfatases ácida e alcalina, de aproximadamente 30 e 17 vezes, respectivamente, no período da metamorfose. A centrifugação diferencial do extrato bruto da cauda e os estudos cinéticos, permitiram a identificação de três fosfatases distintas, sendo uma fosfatase ácida solúvel, uma fosfatase ácida ligada à membrana e uma fosfatase alcalina ligada à membrana por meio da âncora de fosfatidilinositol. A fosfatase ácida ligada à membrana revelou Vm=104,5 U.mg-1; Km=0,29 mM e nH=0,9; a solúvel, Vm= 25,9 U.mg-1; Km=0,33 mM e nH =0,8, enquanto a fosfatase alcalina ligada à membrana revelou Vm=10,5 U.mg-1; Km=0,2 mM e nH=1,0, para a hidrólise do pNPP. Os resultados da espectrometria de massas revelaram a presença de três proteína fosfatases, sendo duas serina/treonina, uma PP2A, uma PP1 e uma tirosina, PTP-LMW. Estudos utilizando substratos específicos para PP2A e PTP-LMW e inibidor para PP1 permitiram confirmar suas presenças na cauda dos girinos de L. catesbeianus. Além disso, a separação em diferentes frações proteicas possibilitou atribuir atividade de PP2A mitocondrial à fosfatase alcalina de membrana, de PTP-LMW à fosfatase ácida solúvel e de PP1 à fosfatase ácida de membrana. Os resultados obtidos levaram à proposta de um modelo de atuação das referidas enzimas no processo de absorção da cauda de anuros durante a metamorfose. Tal modelo propõe a possível função tanto da PP1, quanto da PP2A na sinalização dos eventos que levam à morte celular, bem como o da PTP-LMW na regulação da proliferação celular.