Identificação e purificação de isolados de Cucumber mosaic virus e triagem de genótipos de pimentão para resistência

• Autor(a) principal: Frangioni, Desiré Spada dos Santos [UNESP]
• Data de Publicação: 2001
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/97246
• topic: Virus do mosaico do pepino; Virus - Identificação; Virus - Purificação; Pimentão - Resistência a doenças e pragas

No período de 1998 à 2001, 17 amostras de pimentão ‘Magali-R’ (Capsicum annuum L.) com sintomas de mosaico sistêmico, nanismo, deformação foliar e dos frutos, causando severos danos e perdas econômicas, foram coletadas nas regiões produtoras de Paulínia, Lins, Jacareí, Guaiçara e Lucianópolis, municípios do Estado de São Paulo. Essas amostras foram caracterizadas através de círculo de hospedeiras, DAS-ELISA com o emprego de anticorpo monoclonal contra o CMV-I e CMV-II. Um isolado de cada região foi caracterizado molecularmente, quanto ao subgrupo através da RT-PCR e RFLP com a endonuclease de restrição MspI. As amostras foram inoculadas em plantas indicadoras que reagiram com sintomas típicos do Cucumber mosaic virus (CMV), entre estas, Nicotiana glutinosa demonstrando mosaico sistêmico e ausência de necrose, indicou que os isolados do CMV, em estudo, pertenciam ao subgrupo I. N. glutinosa foi utilizada para manter os isolados, para os testes de ELISA, extração de RNA total e como multiplicadora do vírus para a purificação. Todos os isolados testados no DAS-ELISA reagiram positivamente ao anticorpo monoclonal específico para o CMV-I e negativamente para o CMV-II. Os isolados 1, 3, 4, 15 e 17 foram amplificados com sucesso através da RT-PCR, e produziram um fragmento de 486 pb, tamanho esperado para o subgrupo I. Fragmento que ao ser digerido pela MspI, resultou em duas bandas de 150 e 336 pb, padrão esperado para o CMV-I. O método utilizado na purificação foi eficiente, resultando em uma preparação do CMV purificado, cujo rendimento foi de 40 mg/kg de tecido infectado, permitindo a imunização de galinhas e a produção de um antissoro policlonal específico à partir das gemas dos ovos. O antissoro apresentou alto título em ELISA indireto. A triagem de genótipos de pimentão para a resistência ao CMV... .