Expressão Heteróloga e Estudo Cinético de Oxidorredutases Envolvidas com a Desconstrução da Biomassa

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Buzzo, Bárbara Bonfá
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
Texto Completo: https://hdl.handle.net/11449/254893
Resumo: Atualmente, a aplicação de biocatalisadores em processos industriais impulsiona a exploração de novas enzimas, especialmente aquelas capazes de degradar material lignocelulósico, que pode ser potencialmente utilizado na fabricação de biocombustíveis e outros produtos de grande valor. O etanol de segunda geração é reconhecido como uma alternativa sustentável aos combustíveis fósseis, pois é produzido a partir de resíduos agroindustriais. As enzimas lacases e monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) apresentam um potencial biotecnológico em vários setores industriais, principalmente no setor de sacarificação da biomassa lignocelulósica. Neste cenário, um estudo foi realizado para caracterizar uma nova lacase, denominada Lac_CB10, prospectada de Chitinophaga sp. CB10. As lacases são relevantes em processos industriais por sua capacidade de oxidar compostos não fenólicos sem a necessidade de um mediador redox. A Lac_CB10 revelou propriedades extremófilas, mostrando atividade em condições altamente alcalinas (pH 10,5) e em altas temperaturas (80 - 90 °C), mantendo-se ativa acima de 50% por cinco horas nessas condições. Além disso, a análise espectral confirmou as características típicas das lacases amarelas, indicando seu potencial em aplicações industriais e na biorremediação ambiental, especialmente em ambientes extremos. O estudo com as LPMOs buscou expressar heterologamente três novas LPMOs de diferentes origens (um metagenoma de torta de filtro, um consórcio degradador de biomassa e o genoma de Bacillus thurigiensis). Contudo, os resultados negativos indicaram desafios na expressão dessas enzimas, apontando a necessidade de investigação adicional sobre seu funcionamento. Essa pesquisa destaca as promissoras aplicações industriais de enzimas extremófilas, como a Lac_CB10, em diversas condições, bem como os desafios enfrentados na expressão das LPMOs, abrindo caminho para futuras explorações e avanços no campo das aplicações enzimáticas.
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Neste cenário, um estudo foi realizado para caracterizar uma nova lacase, denominada Lac_CB10, prospectada de Chitinophaga sp. CB10. As lacases são relevantes em processos industriais por sua capacidade de oxidar compostos não fenólicos sem a necessidade de um mediador redox. A Lac_CB10 revelou propriedades extremófilas, mostrando atividade em condições altamente alcalinas (pH 10,5) e em altas temperaturas (80 - 90 °C), mantendo-se ativa acima de 50% por cinco horas nessas condições. Além disso, a análise espectral confirmou as características típicas das lacases amarelas, indicando seu potencial em aplicações industriais e na biorremediação ambiental, especialmente em ambientes extremos. O estudo com as LPMOs buscou expressar heterologamente três novas LPMOs de diferentes origens (um metagenoma de torta de filtro, um consórcio degradador de biomassa e o genoma de Bacillus thurigiensis). Contudo, os resultados negativos indicaram desafios na expressão dessas enzimas, apontando a necessidade de investigação adicional sobre seu funcionamento. Essa pesquisa destaca as promissoras aplicações industriais de enzimas extremófilas, como a Lac_CB10, em diversas condições, bem como os desafios enfrentados na expressão das LPMOs, abrindo caminho para futuras explorações e avanços no campo das aplicações enzimáticas.Currently, the utilization of biocatalysts in industrial processes drives the exploration of new enzymes, especially those capable of degrading lignocellulosic material, potentially used in the production of biofuels and other high-value products. Second-generation ethanol is recognized as a sustainable substitute for fossil fuels as it is derived from agro-industrial waste. Enzymes such as laccases and lytic polysaccharide monooxygenases (LPMOs) show biotechnological potential in various industrial sectors, particularly in the lignocellulosic biomass saccharification field. In this context, a study was conducted to characterize a new laccase, named Lac_CB10, isolated from Chitinophaga sp. CB10. Laccases are valuable in industrial processes due to their ability to oxidize non-phenolic compounds without the need for a redox mediator. Lac_CB10 demonstrated extremophilic properties, exhibiting activity in highly alkaline conditions (pH 10.5) and at high temperatures (80°C - 90°C), maintaining over 50% activity for five hours under these conditions. Furthermore, spectral analysis confirmed the typical features of yellow laccases, indicating its potential in industrial applications and environmental bioremediation, especially in extreme environments. The study involving LPMOs aimed to heterologously express three new LPMOs from different sources (a filter cake metagenome, a biomass-degrading consortium, and the Bacillus thurigiensis genome). However, the negative outcomes indicated challenges in expressing these enzymes, highlighting the need for further investigation into their functionality. These research endeavors collectively underscore the promising industrial applications of extremophilic enzymes, such as Lac_CB10, in diverse conditions, as well as the challenges encountered in LPMO expression, paving the way for future explorations and advancements in the field of enzymatic applications.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)01FunepLemos, Eliana Gertrudes de MacedoBuzzo, Bárbara Bonfá2024-04-02T14:19:51Z2024-04-02T14:19:51Z2023-12-14info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisBUZZO, B. B. - Expressão Heteróloga e Estudo Cinético de Oxidorredutases Envolvidas com a Desconstrução da Biomassa - 2023, 116f - Tese (Doutorado em Microbiologia Agropecuária) - Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal, 2024.https://hdl.handle.net/11449/254893porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESP2024-04-02T14:29:26Zoai:repositorio.unesp.br:11449/254893Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T21:39:28.699238Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
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